靶向心肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建

发布时间：2017-09-13 12:06

  本文关键词：靶向心肌细胞TLR4基因小干扰RNA载体构建

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【摘要】：目的:设计合成有效靶向Toll样受体4(TLR4)基因小干扰RNA(siRNA)表达载体,且挑选TLR4基因稳定沉默心肌细胞。方法:依据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以TLR4基因为靶基因,合成3对小发夹RNA(shRNA)寡核苷酸链,经退火、与线性化pSilence 2.1-U6neo质粒连接、酶切、测序并鉴定。脂质体法转染心肌细胞,新霉素(G418)加压筛选并收集稳定表达质粒的心肌细胞,并观察光镜下心肌细胞形态。RT-PCR及Western Blot法检测收集的心肌细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,确定siRNA对TLR4的抑制效率。结果:测序鉴定插入发夹样序列正确,成功构建了TLR4基因siRNA表达载体;并获得了稳定沉默TLR4的心肌细胞。未见细胞毒性形态学改变。多种方法均证实siRNA作用于TLR4基因后,心肌细胞TLR4 mRNA和蛋白表达均被抑制,其中pSilence2.1-siTLR4-1抑制作用最强。结论:成功构建了靶向TLR4基因siRNA表达载体,并有效抑制心肌细胞TLR4表达。
【作者单位】： 武汉大学中南医院麻醉科;
【关键词】： Toll样受体 RNA干扰 RNA 小分子干扰 心肌细胞
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81471858)
【分类号】：R541
【正文快照】： Toll样受体4(Toll like receptor-4,TLR4)是一种跨膜蛋白受体,TLR4介导的炎症反应在心肌缺血再灌注(I/R)损伤中发挥着重要作用[1]。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种能特异性的抑制靶基因转录的基因沉默技术。本研究通过构建靶向TLR4基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,探讨

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