布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BMEI1135基因缺失株的构建及鉴定

发布时间：2017-09-15 09:43

  本文关键词：布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白BMEI1135基因缺失株的构建及鉴定

  更多相关文章： 布鲁氏菌 BMEI基因 缺失株 自噬相关基因

【摘要】：为了初步探讨BMEI1135基因在布鲁氏菌感染过程中的作用,以16M为模板利用同源重组和抗性替换的方法,构建羊种布鲁氏菌16M(简称16M)BMEI1135基因缺失株(16M△BMEI1135)。将亲本株16M、疫苗株M5-90、缺失株16M△BMEI1135在相同起始浓度下震荡培养,观察其生长变化趋势;将各菌株置于强酸、强碱、高盐、热休克应激条件下,观察其生存率;侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,比较其在胞内的生存能力,并在不同时间点收集细胞提取RNA,通过qRT-PCR检测自噬相关基因的表达。研究结果显示:成功获得了布鲁氏菌BMEI1135基因缺失株且20代内未发生回复性突变现象。与亲本株相比,16M△BMEI1135在体外培养生长趋势与亲本株相似,只是细菌的浓度存在一定差异;突变株体在外界应激条件下生存能力低于亲本株;胞内CFU显示侵染4 h后缺失株胞内细菌数量明显下降(P0.01);qRT-PCR检测到突变株的ULKI、Beclin1表达量均显著降低(P0.01)。本实验的研究结果表明:布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白与16M的胞内生存介导的细胞自噬密切相关,该研究为16M胞内寄生机制的研究奠定了基础。
【作者单位】： 石河子大学生命科学院;石河子大学动物科技学院;商丘师范学院生命科学学院;石河子大学医学院;
【关键词】： 布鲁氏菌 BMEI基因 缺失株 自噬相关基因
【基金】：新疆维吾尔自治区研究生教育创新计划科研创新项目(XJGRI2015040)
【分类号】：S852.61
【正文快照】： 布鲁氏菌(Brucella)是一种兼性细胞内寄生的革兰氏阴性菌其通过控制自身在宿主细胞内的运输来避免溶酶体的降解或抑制巨噬细胞的杀菌作用,而且能在宿主细胞内增殖而不影响细胞的基本功能[41,也不会诱导细胞程序性死亡[51,从而适应胞内环境并导致慢性感染|61。 布鲁氏菌IV型分，

本文编号：855749