金铁锁FPS基因的克隆及表达分析

发布时间：2017-09-16 06:31

  本文关键词：金铁锁FPS基因的克隆及表达分析

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【摘要】：目的从金铁锁Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu中克隆三萜皂苷合成途径中的关键酶法尼基焦磷酸合酶基因FPS,进行序列特征分析和不同组织中的表达情况。方法根据已获得的金铁锁转录组数据,设计FPS基因全长扩增引物,利用RT-PCR方法获得金铁锁FPS基因的全长c DNA序列,并进行TA克隆、序列分析及原核表达;并设计Real-time PCR扩增引物,测定FPS在不同组织中的表达量。结果 FPS c DNA全长1135bp,开放阅读框1029bp,编码342个氨基酸;构建了p EASY-E1-FPS重组质粒,获得稳定的原核表达体系。Real-time PCR结果表示FPS基因在根中的表达量高于叶和茎。结论成功克隆了金铁锁FPS基因,构建了稳定的p EASY-E1-FPS原核表达体系,FPS基因的表达分析表明,FPS在金铁锁不同组织均有表达,根中表达量最高。为进一步研究金铁锁中三萜皂苷合成代谢途径及其关建酶表达模式奠定基础。
【作者单位】： 云南中医学院;
【关键词】： 金铁锁 法尼基焦磷酸合酶(FPS) 基因克隆 表达分析
【基金】：国家自然科学基金(No.81260609;No.81560613) 云南省自然科学基金资助项目[2014FD035,No.2015FB205(-015)]
【分类号】：S567.239
【正文快照】： 稀有濒危物种金铁锁Psammosilene tunicoides W.C.Wu etC.Y.Wu为石竹科(Caryophyllaceae)单型属植物[1],以根入药,是“云南白药”的主要组成药之一,主治跌打损伤,风湿痛,痈疽疮疖,创伤出血等症[2],主要有效成分为金铁锁三萜总皂苷[3]。MVA途径是植物体内皂苷合成的主要途径,在

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本文编号：861440