毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的基因克隆和原核表达分析

发布时间：2017-09-22 12:12

  本文关键词：毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的基因克隆和原核表达分析

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【摘要】：为研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的酶学特征和生理功能,本实验对PtCP3进行了基因克隆和原核表达分析。从毛果杨(Populus trichocarpa Torr.Gray)中克隆得到半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3,将其克隆至pMD-18T载体。进一步构建原核表达载体pET30a-PtCP3,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功诱导表达重组蛋白,然后通过包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化。测序结果表明,PtCP3基因CDS序列全长1074 bp,含有木瓜蛋白酶的保守催化位点和组织蛋白酶B的保守结构域。序列分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3编码357个氨基酸,预测N-末端含有长度为27个氨基酸残基的信号肽序列,去除信号肽后蛋白酶大小为36.515 kDa,理论等电点为7.44。SDS-PAGE电泳结果显示,可以检测到大小约为42 kDa的目的条带,并可通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白PtCP3。
【作者单位】： 北京林业大学生物科学与技术学院;
【关键词】： 毛果杨 半胱氨酸蛋白酶 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
【基金】：国家自然科学基金项目“杨树CEP1类半胱氨酸蛋白酶参与木质部细胞分化和程序化死亡的分子机制研究”(31570582),“杨树4CL基因家族调控木质素生物合成机制研究”(30671697),“杨树半胱氨酸蛋白酶基因结构与酶学特性研究”(J1103516)
【分类号】：S792.11
【正文快照】： 0引言半胱氨酸蛋白酶是植物体内一类十分庞大的蛋白酶家族,广泛参与到植物的各个生理过程。很多研究发现,植物各组织器官的衰老均与半胱氨酸蛋白酶有着密切的关系,而木本植物的PCD过程主要表现为木质部形成以及叶衰老等方面,因此作为基础研究的一个环节,深入开展对于毛果杨半

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本文编号：900745