扁桃脱水素基因AcDHN1的克隆及抗逆功能分析

发布时间：2017-09-22 13:14

  本文关键词：扁桃脱水素基因AcDHN1的克隆及抗逆功能分析

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【摘要】：扁桃主要种植于新疆南疆地区,周期性的冻害天气对扁桃产业有很大的影响,所以扁桃的抗寒性机制一直受到较多的关注。脱水素是一类与胚胎发育和抗逆相关的基因,在抗非生物胁迫时有重大的作用,但目前关于扁桃脱水素基因的研究未见相关报道。本研究从新疆栽培扁桃中克隆获得了AcDHN1基因,进行了序列分析及功能验证,研究结果如下:1.AcDHN1基因克隆及序列分析:从新疆扁桃‘纸皮’中克隆得到ORF开放阅读框为924 bp的Ac DHN1基因(Gen Bank登录号:KT949395)。生物信息学分析显示,该序列编码308个氨基酸,蛋白分子质量32.4 kD,信号肽预测结果显示其不含信号肽且没有跨膜结构域,亚细胞定位于细胞核。结构分析表明该序列有两个Y片段,四个K片段,属于Y2Kn型脱水素基因。氨基酸序列结果显示,扁桃AcDHN1与其他脱水素K片段一致性较高,系统进化分析表明,扁桃AcDHN1和碧桃聚为一类,与苹果、白梨亲缘关系较近。2.表达分析:通过荧光定量PCR分析表明,扁桃AcDHN1在低温、盐及干旱胁迫下均有表达。其中,受低温胁迫的诱导比较强烈。3.亚细胞定位分析:构建表达载体p1304-AcDHN1通过农杆菌浸染洋葱表皮,对AcDHN1蛋白进行亚细胞定位分析表明在洋葱表皮细胞核内能检测到绿色荧光蛋白,说明AcDHN1基因定位于细胞核。4.原核表达分析:构建原核表达载体,在大肠杆菌(DE3)中表达大约为52 kD的蛋白质。对诱导条件进行优化结果表明,重组蛋白pET-AcDHN1在IPTG浓度为0.1 mmol/L、诱导3 h时,表达量达到最佳。5.转基因功能验证:将AcDHN1构建到p CAMBIA1303载体上,通过农杆菌介导法转化烟草。Kan筛选后通过PCR检测证实外源基因AcDHN1已经成功转入烟草中。对不同逆境胁迫下转基因烟草及对照组烟草进行生理生化指标测定,结果证实Ac DHN1基因在烟草中的过表达增强了其对非生物逆境胁迫的耐受性。
【关键词】：扁桃 AcDHN1 qRT-PCR 亚细胞定位 原核表达分析 转基因烟草
【学位授予单位】：新疆农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q943.2
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 缩略语表7-8
• 第1章 引言8-17
• 1.1 脱水素基因结构及分类8-10
• 1.2 脱水素基因在植物组织中的定位、亚细胞定位10-12
• 1.3 脱水蛋白体外功能的研究12-13
• 1.4 脱水素基因的表达与调控13-14
• 1.5 课题的研究意义14-17
• 第2章 扁桃Ac DHN1基因的克隆及生物信息学分析17-29
• 2.1 材料17-18
• 2.2 试验方法18-22
• 2.3 结果与分析22-28
• 2.4 讨论28-29
• 第3章 扁桃Ac DHN1基因功能的初步分析29-40
• 3.1 材料29-31
• 3.2 方法31-34
• 3.3 结果与分析34-38
• 3.4 讨论38-40
• 第4章 转基因烟草及抗逆功能分析40-56
• 4.1 材料40-42
• 4.2 方法42-47
• 4.3 结果与分析47-54
• 4.4 讨论54-56
• 第5章 结论56-57
• 参考文献57-63
• 致谢63-64
• 作者简历64

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1 王敏;扁桃脱水素基因AcDHN1的克隆及抗逆功能分析[D];新疆农业大学;2016年

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本文编号：901006