AMPK的调控对PD转基因果蝇模型的影响

发布时间：2017-09-24 13:25

  本文关键词：AMPK的调控对PD转基因果蝇模型的影响

  更多相关文章： 帕金森转基因果蝇 PINK1 AMPK 线粒体

【摘要】：目的:探讨AMPK的调控是否对PINK1突变型PD转基因果蝇具有神经保护作用及其作用的相关机制。方法:利用经典的PD关基因PINK1无效突变的PD转基因果蝇模型—PINK1~(B9)。使用MHC-Gal4启动子,利用经典的GAL4/UAS系统,使果蝇帕金森疾病的特征于肌肉组织中特异性表达,构建MHC-GAL4系统的PD转基因果蝇模型。应用Western Blot检测PD模型中AMPK活化型蛋白表达水平,探讨基因突变型PD中是否存在AMPK的活化异常。并进一步对PD转基因果蝇通过启动过表达AMPK和RNA干扰AMPK调控其AMPK的表达量。通过观察其翅膀异常率、飞行率及肌肉ATP水平、线粒体氧化呼吸链复合物I的组分m RNA ND42的表达及其相应的蛋白NDUFS-3的表达量来检测其功能的改变。探索AMPK的调控在PD发病机制中的作用,并探索其作用的具体机制。结果:在PINK1~(B9)转基因PD果蝇模型中AMPK的主要活化形式P-AMPK-α蛋白表达水平较正常对照明显下降。不论是过表达AMPK,还是RNA干扰敲低AMPK的表达,对PD转基因果蝇PINK1~(B9)进行干预,均能够挽救PD转基因果蝇模型翅膀异常的表型,且均使PD模型组的活化形式的AMPK蛋白的表达水平相应改变。检测调控AMPK表达后的PD转基因果蝇中线粒体功能后发现,具有严重线粒体功能障碍的PD转基因果蝇的线粒体功能明显提高,飞行肌中线粒体形态得到改善,其ATP水平也显著提高,标志线粒体功能的线粒体氧化呼吸链Complex I的亚基ND42的m RNA及NDUFS-3蛋白的表达量均比模型组显著提高。结论:不仅AMPK的激活形式可以挽救PD模型,通过RNA干扰调控AMPK表达下调仍可以通过直接对线粒体功能的调节来挽救PINK1~(B9)的线粒体功能。
【关键词】：帕金森转基因果蝇 PINK1 AMPK 线粒体
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：Q78
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 英汉缩略词对照表8-9
• 前言9-12
• 1 材料与方法12-22
• 1.1 实验材料12
• 1.2 主要试剂、耗材及试剂的配制12-14
• 1.3 主要实验仪器14
• 1.4 实验方法14-22
• 2 结果22-34
• 2.1 MHC-GAL4/UAS系统PD转基因果蝇模型22-26
• 2.2 AMPK的调控对PD转基因果蝇表型的保护作用26-32
• 2.3 AMPK的调控对PD转基因果蝇的线粒体功能障碍具有挽救作用32-33
• 2.4 AMPK的调控提高PD转基因果蝇线粒体氧化呼吸链复合物I功能33-34
• 3 讨论34-36
• 4 结论36-38
• 参考文献38-41
• 综述41-58
• 参考文献51-58
• 攻读学位期间发表的学术论文目录58-59
• 致谢59

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本文编号：911685