桂糖11号Rubisco基因克

发布时间：2017-09-24 19:42

  本文关键词：桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化

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【摘要】：【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisco大、小亚基基因(rbc L和rbc S)的编码域序列(CDS)设计特异性引物,PCR扩增rbc L和rbc S基因的CDS,然后连接至原核表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒后转入原核细胞(大肠杆菌Rosetta)中诱导表达,用镍亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,并比较分析桂糖11号与其他甘蔗品种在rbc L和rbc S基因的CDS及编码蛋白序列方面的差异。【结果】rbc L和rbc S基因的CDS长度分别为1431和510 bp,其中桂糖11号rbc L基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar SP80-3280(Gen Bank登录号AE009947)、Saccharum hybrid cultivar Q155(Gen Bank登录号KU214867)的一致,桂糖11号rbc S基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar GT28(Gen Bank登录号JN591757)的存在7个碱基差异,但仅有2个氨基酸发生错义突变。Rbc L和Rbc S融合蛋白以包涵体形式存在原核细胞中,用镍离子亲和层析纯化及超滤浓缩后其浓度均在1.0 mg/m L以上。【结论】从桂糖11号成功克隆Rubisco大亚基和小亚基基因的CDS,大亚基基因的CDS比小亚基的保守性更高,且均可在原核细胞中高度表达,经纯化浓缩获得的高纯度融合蛋白可用于制备Rubisco单克隆抗体。
【作者单位】： 广西大学农学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室;玉林师范学院生命科学与技术学院;广西农业科学院甘蔗研究所/中国农业科学院甘蔗研究中心/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室;
【关键词】： 甘蔗 -二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco) 克隆 原核表达 融合蛋白 纯化
【基金】：国家“863”计划项目(2013AA102604) 广西八桂学者和特聘专家专项基金项目(厅发[2013]3号)
【分类号】：S566.1
【正文快照】： (1Agricultural College,Guangxi University/State Key Laoratory of Conservation and Utilization of SubtropicalAgrobioresources,Nanning 530005,China;2Sugarcane Research Institute,Guangxi Academy of Agricultural Sciences/Sugarcane Research Center,Chinese Aca

【参考文献】

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1 崔喜艳;董雅致;刘晓庆;张治安;;栽培大豆Rubisco小亚基基因(rbcS)全长cDNA的克隆及原核表达[J];中国油料作物学报;2014年03期

2 谢翎;陈红梅;尹，

本文编号：913133