猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究

发布时间：2017-09-25 05:48

  本文关键词：猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究

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【摘要】：为初步研究猪TRIM11的免疫学功能,以猪颌下淋巴结cDNA为模板扩增TRIM11基因cDNA并对该基因进行了蛋白质结构预测和组织表达谱分析,将该基因与PiggyBac载体相连获得真核表达载体PB-TRIM11,之后转染PK15细胞获得稳定表达细胞系。用猪伪狂犬病毒(PRV)刺激过表达TRIM11PK15细胞和对照组细胞后,于不同时间收获细胞上清,比较两组细胞上清中病毒滴度变化。结果表明,猪TRIM11的ORF长度为1 407bp,编码468个氨基酸,该氨基酸序列含有3个TRIM家族保守的结构域。组织表达谱分析显示,猪TRIM11在脂肪组织、肺的表达量较高,而在心、回肠、十二指肠、直肠中的转录量较低。成功克隆了猪TRIM11cDNA序列并构建了真核转录载体PB-TRIM11,qRT-PCR检测结果表明TRIM11在PK15细胞系中成功表达。检测感染PRV后过表达TRIM11PK15细胞和对照组细胞上清液病毒的TCID50发现过表达TRIM11组的病毒滴度始终高于对照组。过表达TRIM11有一定的促进PRV增殖的作用,为进一步研究猪TRIM11在天然免疫中的作用奠定了基础。
【作者单位】： 河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室;
【关键词】： 三基序结合蛋白 猪伪狂犬病毒 病毒增殖 稳定细胞系
【基金】：国家自然科学基金(3149600030) 农业部转基因专项(2014ZX0801015B) 河南省基础与前沿技术研究计划项目(142300413209)
【分类号】：S852.4
【正文快照】： 三基序结合蛋白(TRIM)家族在人上已发现超过70个家族成员。所有的TRIM蛋白都含有一个由锌指结构、1或2个B-box、1个卷曲螺旋(RBCC)组成的N端三结构域[1]。TRIM蛋白功能多种多样,除了参与细胞增殖、分化、发育、形态发生和细胞凋亡,也在免疫相关信号通路和抗病毒免疫反应中发挥

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本文编号：915727