NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证

发布时间：2017-09-26 04:00

  本文关键词：NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证

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【摘要】：为了定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,通过去除逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子,并分别插入NF-κB增强子序列及荧光素酶NanoLuc报告基因序列,构建了一种新的含有NF-κB增强子序列和NanoLuc(NLuc)报告基因序列的表达载体,并进一步建立受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系。酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pQCXIP-NF-κB-NLuc;NF-κB信号通路的刺激物肿瘤坏死因子TNF-α作用于构建的稳定表达NLuc的细胞系后出现特异性的荧光素酶反应,且该酶反应与TNF-α的刺激呈良好的时间、剂量依赖性,该结果表明受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系构建成功。实例验证中,NF-κB抑制剂雷公藤甲素对此细胞系NLuc荧光素酶表达的抑制呈剂量效应。综上,本实验构建的受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的报告基因系统可用于NF-κB的活化效果的定量检测及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,具有研究和应用价值。
【作者单位】： 北京中医药大学中药学院;中国中医科学院医学实验中心北京市重点实验室;中国人民解放军总医院骨科;
【关键词】： NF-κB 荧光素酶NanoLuc 报告基因系统
【基金】：国家自然科学基金(Nos.31170829,81171762,81550017,81473418) 中国中医科学院自主选题项目(No.zz2015015)资助~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： Received:May 5,2016;Accepted:June 20,2016Supported by:National Natural Science Foundation of China(Nos.31170829,81171762,81550017,81473418),Research Project ofCACMS(No.zz2015015).Corresponding authors:Changzhen Liu.Tel:+86-10-64089526;E-mail:lcz0220@163.

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本文编号：921310