花生iso-ARah3基因克隆及多克隆抗体制备

发布时间：2017-09-29 18:15

  本文关键词：花生iso-ARah3基因克隆及多克隆抗体制备

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【摘要】：类花生致敏原3(iso-ARah3)是花生致敏原3的同系物,其表达活性与干旱及黄曲霉侵染相关。本研究通过RT-PCR技术从花生种子cDNA文库中克隆获得iso-ARah3的开放阅读框(ORF),全长1533bp,编码510个氨基酸,N端预测有20个氨基酸的信号肽序列。通过序列比对发现,该克隆序列有1处缺失突变,其N端210个氨基酸序列与胰蛋白酶抑制因子的同源性较高,达83.60%。通过构建原核表达载体pET28a-isoARah3,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,融合蛋白His-isoARah3获得高效表达,分子量约54kD。His-isoARah3经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的iso-ARah3多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比(1∶512000)很好的抗体。通过对融合蛋白的诱导前和纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示仅在纯化样品相应位置(54kD)有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性。本研究结果为深入研究花生iso-ARah3基因的功能奠定了基础。
【作者单位】： 山东省花生研究所;哈尔滨工业大学市政环境工程学院;青岛科技大学化工学院;
【关键词】： 花生 黄曲霉毒素 序列分析 原核表达 多克隆抗体
【基金】：2014年国家“万人计划”青年拔尖人才 国家花生产业技术体系项目(CARS-14) 山东省自然科学基金项目(ZR2014YL011;ZR2014YL012) 国家自然科学基金项目(31200211) 山东省农业科学院青年科研基金项目(2016YQN14)
【分类号】：S565.2
【正文快照】： 黄曲霉毒素是由真菌类的黄曲霉和寄生曲霉代谢产生的一类真菌毒素,普遍存在于土壤、作物种子及其各种制品中,花生是受黄曲霉侵染和危害最严重的作物之一,已成为全球花生产业发展的主要限制因素之一[1-3]。目前,国内外学者普遍认为解决花生黄曲霉毒素污染问题经济有效的可行途

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本文编号：943501