两种密码子优化的Cas9编码基因在斑马鱼胚胎中基因敲除效率的比较
本文关键词：两种密码子优化的Cas9编码基因在斑马鱼胚胎中基因敲除效率的比较
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【摘要】：为在斑马鱼中获得特异且高效的基因敲除,多个实验室独立人工合成了序列彼此不一的Cas9 c DNA序列,并克隆入不同的体外转录载体。本文选取两种斑马鱼密码子优化的Cas9编码序列(z Cas9_bz和z Cas9_wc),对斑马鱼胚胎中的7个基因(外源egfp及内源chd、hbegfa、th、eef1a1b、tyr、tcf7l1a)分别进行敲除,通过PCR产物测序、克隆测序和表型分析比较了两种Cas9的敲除效率。结果发现,z Cas9_wc在各种情况下都显现出较高的敲除效率,而z Cas9_bz的效率相对较低。
【作者单位】： 中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室;
【关键词】： CRISPR/Cas 斑马鱼 基因敲除 突变效率
【基金】：国家重大科学研究计划项目(编号:2012CB944504) 中国科学院重点部署项目(编号:KSZD-EW-Z-001) 国家自然科学基金项目(编号:31222052)资助~~
【分类号】：Q78
【正文快照】： 基因敲除是开展基因功能研究最为重要的技术手段之一。近年来,新一代人工核酸内切酶技术——CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspacedshort palindromic repeats/CRISPR-associated protein)被广泛地应用于小鼠(Mus musculus)[1]、果蝇(Dro-sophila melanogaster)[2]、斑
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本文编号：950660
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