家蚕保幼激素信号途径中转录因子BmKr-h1的基因克隆与表达分析

发布时间：2017-10-01 22:15

  本文关键词：家蚕保幼激素信号途径中转录因子BmKr-h1的基因克隆与表达分析

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【摘要】：Krüppel homolog 1(Kr-h1)是含有C2H2锌指结构的转录因子,在昆虫变态发育中起重要作用。从家蚕5龄第3天幼虫的表皮中克隆了Bm Kr-h1基因,该基因全长c DNA为1 918 bp,其中开放阅读框1 047 bp,GC含量42.2%,编码348个氨基酸。氨基酸序列比对分析发现大部分昆虫物种的Kr-h1都含有8个锌指结构,暗示该蛋白质的功能具有一定的保守性。通过生物信息学方法预测Bm Kr-h1不含信号肽和糖基化位点,但含有19个可能的磷酸化位点,暗示其活性可能受到磷酸化和去磷酸化修饰的影响。利用原核表达系统表达获得了可溶的Bm Kr-h1蛋白并制备了抗体。Western blot和半定量RT-PCR检测的结果显示,不论在mRNA水平还是蛋白质水平,Bm Kr-h1在家蚕幼虫5龄初期和吐丝期的翅原基都有较高水平表达,而在蛹期的表达量较低。用保幼激素(JH)类似物Methoprene和蜕皮激素(20E)分别注射家蚕5龄第3天幼虫,发现2种激素均能诱导蚕体内Bm Kr-h1的表达上调。免疫组织化学结果显示,Bm Kr-h1在5龄第3天幼虫各组织中的表达量很低,而在吐丝期的中肠、脂肪体和表皮中都有一定水平的表达,暗示其可能参与家蚕蜕皮变态的过程。上述结果表明Bm Kr-h1可以响应JH和20E的诱导,提示其在家蚕的变态发育中发挥作用。
【作者单位】： 华南师范大学生命科学学院 广州市昆虫发育调控与应用研究重点实验室;
【关键词】： 家蚕 保幼激素信号途径转录因子 基因克隆 序列结构 诱导表达
【基金】：国家自然科学基金重点项目(No.31330071);国家自然科学基金青年基金项目(No.31301918)
【分类号】：S881.2;Q78
【正文快照】： 全变态昆虫一生经历卵-幼虫-蛹-成虫的变化过程,各发育阶段的虫体在外部形态上有着明显的区别。其中,昆虫蜕皮和变态的过程是由体内的蜕皮激素(ecdysteroids,20E)与保幼激素(juvenilehormone,JH)共同调控。目前,对于蜕皮激素的信号通路调控机制的研究已经相对清楚[1],而保幼激

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本文编号：955958