鸡胚胎干细胞诱导为雄性生殖细胞及转基因鸡的制备

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鸡胚胎干细胞诱导为雄性生殖细胞及转基因鸡的制备

     论文目录

摘要第1-7页

ABSTRACT第7-11页

缩略词表第11-17页

第一章 文献综述第17-41页

 1 胚胎干细胞第17-19页

   ·胚胎干细胞鉴定第17-18页

     ·细胞形态学鉴定第17页

     ·碱性磷酸酶活性(AKP)和胚胎阶段特异性表面抗原(SSEA-1)鉴定第17-18页

   ·胚胎干细胞体外培养第18-19页

   ·胚胎干细胞的应用第19页

 2 生殖细胞第19-22页

   ·精原干细胞特性第20页

   ·精原干细胞体外培养第20-21页

   ·精原干细胞的应用第21-22页

     ·转基因动物生产第21页

     ·临床应用第21-22页

 3 ES细胞诱导分化为雄性生殖细胞第22-30页

   ·影响ES分化为雄性生殖细胞的因素第22-26页

     ·内源性因素第22-25页

     ·外源性因素第25-26页

   ·ES向生殖细胞方向分化的诱导方法第26-28页

     ·改变细胞的培养条件第26-28页

     ·导入外源性基因第28页

     ·体内诱导第28页

   ·ES向生殖细胞方向分化的研究进展第28-29页

   ·体外诱导ES分化为生殖细胞的应用前景第29-30页

 4 本研究的目的和意义第30-31页

 5 参考文献第31-41页

第二章 鸡胚ESC和SSCs形态学及差异蛋白标记的比较第41-58页

 1 材料与方法第42-48页

   ·实验材料第42页

   ·试剂第42页

   ·鸡胚成纤维细胞(CEF)制备第42页

   ·鸡胚成纤维细胞传代第42-43页

   ·鸡胚成纤维细胞冻存第43页

   ·鸡胚成纤维细胞解冻第43页

   ·饲养层的制备第43页

   ·获取鸡ES细胞和SSCs细胞第43-44页

     ·ES细胞的培养及传代第43-44页

     ·SSCs细胞的培养及传代第44页

   ·碱性磷酸酶活性(AKP)活性鉴定第44页

   ·胚胎阶段特异性表面抗原(SSEA-1)免疫荧光鉴定第44页

   ·细胞RNA提取第44-45页

   ·Reverse Transcription-PCR(RT-PCR)检测第45-46页

   ·免疫细胞化学检测第46-47页

   ·Western blot检测第47-48页

 2 结果第48-52页

   ·ES细胞和SSCs细胞形态比较第48-49页

   ·ES和SSCs细胞未分化状态检测第49-50页

   ·ES和SSCs细胞mRNA水平上差异比较结果第50-51页

   ·ES和SSCs细胞蛋白水平上差异比较结果第51-52页

 3 讨论第52-54页

 4 参考文献第54-58页

第三章 视黄酸对鸡ESC向雄性生殖细胞分化的影响第58-71页

 1 材料和方法第58-62页

   ·实验材料第58页

   ·主要仪器和设备第58页

   ·主要试剂第58页

   ·ES细胞性别鉴定第58-59页

   ·筛选适宜视黄酸浓度第59-60页

   ·适宜浓度诱导ES细胞向生殖细胞方向分化第60页

   ·荧光定量PCR检测特定基因的表达第60-62页

   ·免疫细胞化学检测第62页

 2 结果第62-66页

   ·雄性ES细胞筛选第62-63页

   ·不同浓度诱导后细胞形态学变化第63页

   ·半定量PCR检测不同浓度诱导后相关基因表达情况第63页

   ·ES自分化实验组第63-64页

   ·免疫细胞化学检测结果第64页

   ·适宜视黄酸浓度诱导ES细胞形态变化第64页

   ·荧光定量PCR检测RA诱导实验组基因变化结果第64-65页

   ·免疫细胞化学检测结果第65-66页

 3 讨论第66-67页

 4 参考文献第67-71页

第四章 不同基质蛋白对ESC向雄性生殖细胞方向分化的影响第71-83页

 1 材料和方法第71-72页

   ·实验材料第71页

   ·主要仪器和设备第71页

   ·主要试剂第71-72页

   ·筛选雄性ES细胞第72页

   ·基质蛋白包被及雄性ES细胞接种培养第72页

   ·荧光定量PCR检测特定基因的表达第72页

   ·免疫细胞化学检测第72页

 2 结果第72-76页

   ·细胞形态变化第72-73页

   ·不同基质蛋白诱导后荧光定量检测基因表达情况第73-75页

   ·免疫细胞化学检测结果第75-76页

 3 讨论第76-80页

 4 参考文献第80-83页

第五章 睾丸支持细胞、睾丸提取液及综合因素对ESC向雄性生殖细胞分化的影响第83-104页

 1 材料和方法第83-88页

   ·实验材料第83-84页

   ·主要仪器和设备第84页

   ·主要试剂第84页

   ·睾丸支持细胞原代分离第84页

   ·支持细胞传代第84页

   ·鸡胚支持细胞冻存第84-85页

   ·鸡胚支持细胞解冻第85页

   ·支持细胞鉴定第85-86页

     ·油红染色第85页

     ·支持细胞相关基因表达的检测第85-86页

   ·丝裂霉素-C处理第86页

   ·支持细胞与雄性ES细胞共培养第86-87页

   ·不同时期睾丸组织提取液制备第87页

   ·不同时期睾丸组织条件培养基提取第87页

   ·睾丸组织提取液和条件培养基共同诱导ES细胞第87-88页

   ·综合因素诱导组第88页

 2 结果第88-98页

   ·支持细胞形态学观察第88页

   ·油红O染色第88页

   ·鸡胚支持细胞RT-PCR鉴定第88-89页

   ·支持细胞和ES细胞共培养后细胞形态变化第89-90页

   ·诱导后荧光定量检测相关基因表达情况第90页

   ·免疫细胞化学检测特定蛋白表达情况第90-91页

   ·不同时期睾丸组织提取液诱导组第91-93页

   ·不同时期睾丸组织条件培养液诱导组第93-96页

   ·综合因素诱导实验组结果第96-98页

 3 讨论第98-101页

 4 参考文献第101-104页

第六章 SSCs体内介导法制备抗病转基因鸡第104-114页

 1 材料与方法第104-106页

   ·试验材料第104页

   ·睾丸注射第104-105页

   ·睾丸冰冻切片检测第105页

   ·人工授精第105页

   ·PCR检测第105-106页

     ·引物设计及合成第105页

     ·PCR扩增检测第105-106页

   ·睾丸组织基因组dot blotting检测第106页

   ·RT-PCR检测EGFP-MMx基因的表达情况第106页

   ·Western blot检测EGFP-MMx融合蛋白的表达第106页

 2 结果第106-111页

   ·睾丸冰冻切片检测第107页

   ·睾丸组织基因组PCR结果第107-108页

   ·睾丸组织基因组dot blotting检测第108页

   ·精液品质检测第108-109页

   ·精液PCR检测结果第109页

   ·F1代胚胎荧光检测结果第109页

   ·血液PCR检测结果第109-110页

   ·RT-PCR检测EGFP-MMx基因的表达结果第110页

   ·Western blot检测结果第110-111页

 3 讨论第111-112页

 4 参考文献第112-114页

第七章 结论和创新点第114-115页

致谢第115-116页

博士期间发表的论文第116-117页

论文编号BS1893027，这篇论文共117页
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