黄梁木蔗糖转运蛋白基因克隆及其表达模式分析

发布时间：2017-10-02 12:33

  本文关键词：黄梁木蔗糖转运蛋白基因克隆及其表达模式分析

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【摘要】：黄梁木(Neolamarckia cadamba),又称团花树,茜草科团花属树种,在食用、药用以及工业用途等众多方面都发挥着不容小觑的作用,是一种重要的速生经济树种。而蔗糖为根部、生殖结构、储存和发育器官等的异养细胞提供大量的营养物质,为了确保这些异样的库组织的生长和发育接收到足够量的蔗糖,蔗糖转运蛋白在整个植物中对蔗糖的膜运输及分布起到关键作用。因此,对黄梁木的蔗糖转运蛋白基因的研究,有助于进一步了解蔗糖在黄梁木中转运机制和作用机理以便充分加以利用。本文通过对转录组数据的比对设计引物从黄梁木中克隆得到三个蔗糖转运蛋白基因的全长cDNA,分别命名为NcSUT2、NcSUT3和NcSUT4。这三个基因分别编码522、623、505个氨基酸;对它们进行生物信息学分析表明,这三个基因编码的蛋白质均属于疏水性蛋白,且均具有蔗糖转运蛋白典型的十二个跨膜结构域。NcSUT2-GFP、NcSUT3-GFP和NcSUT4-GFP融合蛋白在拟南芥和黄梁木原生质体的瞬时表达定位显示,NcSUT2定位在质膜上,NcSUT3可能定位在质膜或叶绿体上,NcSUT4定位在叶绿体上。荧光定量分析发现,NcSUT2、NcSUT3、NcSUT4在韧皮部、嫩叶、根部、树皮上均有表达,但表达量存在明显差异,且随着生长季的不同而有所变化,同时在不同树龄之间也会存在表达差异。
【关键词】：黄梁木 蔗糖转运蛋白 基因克隆 表达模式
【学位授予单位】：华南农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S792.99
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 1.前言8-20
• 1.1 黄梁木概述8-9
• 1.2 蔗糖转运蛋白概述9-16
• 1.2.1 植物蔗糖转运蛋白的存在10-11
• 1.2.2 植物蔗糖转运蛋白的分类11-12
• 1.2.3 植物蔗糖转运蛋白的亚细胞定位12-13
• 1.2.4 植物蔗糖转运蛋白的表达调控13-16
• 1.2.5 植物蔗糖转运蛋白的功能16
• 1.3 基因克隆的方法16-18
• 1.3.1 功能克隆16-17
• 1.3.2 转座子标签法17
• 1.3.3 图位克隆法17
• 1.3.4 差异表达分析法17
• 1.3.5 同源克隆法17-18
• 1.4 基因表达定量分析方法概述18-19
• 1.4.1 RNA印迹18
• 1.4.2 核糖核酸酶保护分析18
• 1.4.3 蛋白质印迹18
• 1.4.4 实时荧光定量PCR18-19
• 1.5 研究目的意义及主要内容19-20
• 1.5.1 研究目的意义19
• 1.5.2 主要内容19-20
• 2.材料与方法20-37
• 2.1 材料20-22
• 2.1.1 植物材料20
• 2.1.2 菌株和质粒20
• 2.1.3 主要试剂及试剂盒20
• 2.1.4 主要仪器及设备20
• 2.1.5 主要试剂及材料配方20-22
• 2.2 方法22-37
• 2.2.1 黄梁木蔗糖转运蛋白基因NcSUTs的克隆22-27
• 2.2.2 黄梁木NcSUTs生物信息学分析27-28
• 2.2.3 黄梁木NcSUTs-GFP原生质体瞬时表达的定位观察28-33
• 2.2.4 黄梁木NcSUTs gDNA全长扩增33-36
• 2.2.5 黄梁木NcSUTs表达量分析36-37
• 3.结果与分析37-54
• 3.1 黄梁木RNA提取37-38
• 3.2 黄梁木NcSUTs核苷酸序列的同源克隆38-44
• 3.3 黄梁木NcSUTs生物信息学分析44-47
• 3.3.1 蛋白理化性质及结构预测分析44-46
• 3.3.2 蛋白亚细胞定位分析46-47
• 3.4 黄梁木NcSUTs-GFP原生质体瞬时表达的定位分析47-51
• 3.5 黄梁木NcSUTs基因表达量分析51-54
• 3.5.1 黄梁木同一器官不同基因的表达量分析51-52
• 3.5.2 黄梁木同一基因在不同器官的表达量分析52-53
• 3.5.3 黄梁木韧皮部不同树龄NcSUTs表达量分析53-54
• 4.结论与讨论54-58
• 4.1 结论54-55
• 4.2 讨论55-58
• 4.2.1 黄梁木NcSUTs基因克隆及同源比对分析55
• 4.2.2 黄梁木NcSUTs亚细胞定位55-56
• 4.2.3 黄梁木NcSUTs基因的表达分析56-58
• 致谢58-60
• 参考文献60-63
• 附录63-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：959672