基因修饰人BMSCs构建组织工程骨的实验研究

发布时间：2017-10-04 19:36

  本文关键词：基因修饰人BMSCs构建组织工程骨的实验研究

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【摘要】：目的探索构建可稳定表达修饰基因人BMP-2(human BMP-2,hBMP-2)的细胞组织工程骨促进骨再生的可行性。方法从成人肌肉组织中以RT-PCR方法克隆hBMP-2基因全长,连接构建真核质粒载体,经脂质体转染人BMSCs(humanBMSCs,hBMSCs)。设定hBMP-2基因转染细胞组、空质粒载体转染细胞组以及同代细胞正常培养组,经G418筛选培养后,分别行细胞ALP比活性测定、细胞hBMP-2免疫组织化学染色、hBMP-2 mRNA表达水平的RT-PCR检测及细胞上清的hBMP-2分泌水平的免疫酶斑点(dot-ELISA)检测。然后将基因转染细胞与羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)材料进行复合培养,观察组织工程骨的构建情况。动物实验分4组,每组3只裸鼠,于裸鼠双侧背脊肌内分别植入hBMP-2基因转染细胞与HA材料复合培养体(A组),空载质粒转染细胞复合HA材料(B组)、单纯基因转染细胞悬液(C组)以及hBMP-2基因质粒加脂质体(D组)作为对照。4组裸鼠均于4周后取材、脱钙、切片,行HE染色及阿尔新蓝染色观察新骨形成情况。结果 hBMP-2基因转染细胞在培养48 h和3周时均可表达分泌外源基因hBMP-2,免疫组织化学染色呈阳性,且成骨分化的ALP比活性明显高于两对照组(P0.05)。转染细胞能良好贴附于HA表面生长。动物实验中,A组3只裸鼠6侧背脊肌内4侧有较多新骨生成;B组3只裸鼠中的1只双侧背脊肌内有新骨生成;C组未发现新骨生成;D组1只裸鼠1侧背脊肌内发现少量成骨。结论 hBMP-2基因转染修饰的h BMSCs与HA复合培养构建的组织工程骨,可瞬时和稳定表达分泌hBMP-2,并能促进裸鼠肌肉组织内异位成骨。
【作者单位】： 北京大学深圳医院脊柱外科·深圳市脊柱外科重点实验室;
【关键词】： 组织工程骨 BMSCs BMP- 基因治疗 转染
【基金】：广东省医学科研基金资助项目(A2014654)~~
【分类号】：R68
【正文快照】： 自体骨植骨促进骨组织再生愈合是临床治疗骨缺损和脊柱融合的经典方法,重组BMP蛋白类的骨诱导因子也已广泛应用于临床,但自体骨取骨并发症和来源不足以及重组蛋白的异化致炎性和释放不可控性等问题常会影响临床疗效,研发促进骨再生的新方法意义重大[1-2]。骨再生需要在局部和

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本文编号：972470