油菜内生细菌多样性及对菌核病的拮抗研究

发布时间：2020-11-07 13:02

　　 本研究从湖南农业大学生物科学技术学院试验田采集油菜湘油15盛花期植株的根、茎和叶,采用纯培养法对内生细菌进行分离纯化,采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析法对内生菌株的多样性进行分析研究,利用琼脂扩散法对内生菌株进行抗菌活性筛选,利用平板对峙法对油菜菌核病病原菌核盘菌的拮抗菌进行筛选,继而对其拮抗机理进行初步研究。为该地区油菜内生细菌资源的进一步研究、及其在油菜菌核病生物防治等方面的应用提供实验依据和理论指导。1.选用肉汤琼脂培养基(LBA)、营养琼脂培养基(NA)、牛肉膏-蛋白胨培养基(牛)和10%茎杆汁特殊因子培养基(T)为分离培养基,从油菜根茎叶样品中共分离纯化得到68株内生细菌。比较菌落形态,筛选出18株表观差异较大的内生细菌进行下一步实验。2.对代表性内生菌株进行16S rRNA基因序列测定和系统发育分析,结果表明,18株内生细菌具有较高的类群、遗传和物种多样性,可分为14个物种(species),分属于细菌域(Bacteria)的2个门(Firmicutes,Actinobacteria)的3个科(Bacillaceae,Pseudomonadaceae,Enterobacteriaceae),4个属:芽孢杆菌属(Bacillus),假单胞菌属(Pseudomonas),拉恩氏菌属(Rahnella)和埃希氏菌属(Escherichia)。其中芽孢杆菌属和假单胞菌属菌株分别有8株和7株,为优势类群。3.选用枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌、大肠埃希菌、变形杆菌和黑曲霉作为指示菌,采用琼脂扩散法对68株内生细菌进行抗菌活性筛选,得到7株抗菌活性较强的菌株(Y171004、Y172014、Y173005、Y174007、Y174017、Y177001、Y177002),并对其进行生理生化特征研究。菌株Y171004、Y172014、Y174007、Y177001、Y177002为芽孢杆菌属,菌株Y173005为假单胞菌属,菌株Y174017为埃希氏菌属。以上内生细菌的成功分离,一定程度上填补了油菜内生菌的研究空白,为研究有益菌株以及油菜与内生菌之间的联系提供了一定的参考。4.利用平板对峙法对核盘菌进行拮抗实验,筛选出2株具有较强拮抗能力的菌株,并对其拮抗机理进行了初步研究。菌株Y171004和Y177002对核盘菌具有较好的拮抗作用。在光学显微镜下观察受到抑制的病原菌,发现其菌丝均有不同程度的皱缩或变粗、变色。菌株Y171004的发酵液蛋白粗提物具有抗菌活性,经95℃水浴30 min后抗菌活性丧失,说明其抗菌活性蛋白耐高温性差。菌株Y177002的发酵液蛋白粗提物不具有抗菌活性,说明其抗菌活性物质是非蛋白类。经SDS-PAGE分析,菌株Y171004抑菌活性蛋白的分子量约为45~65KDa。
【学位单位】：吉首大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S435.654;S476.1
【部分图文】：

第 1 章 前言对分离得到的内生细菌的发酵产物进行抗菌活性筛选，筛选出一批产抗质的菌株，为各个领域对油菜内生细菌及其代谢产物的开发利用打下一 菌核病拮抗菌的筛选及拮抗机理的初步研究核盘菌为病原菌，采用平板对峙法，用抗菌活性菌株做出发菌株，进行抗菌抗菌筛选，从中筛选出一批拮抗菌株，为油菜菌核病的生物防治研定的理论与实践基础。技术路线究技术路线图如下（图 1-4-1）。

图 2.2.1 8 株厚壁菌门菌株基于 16S rRNA 基因序列构建的系统发育树 2.2.1 Phylogenetic tree constructed from 16s rRNA gene sequences of 8 Firmicute

图 2.2.1 8 株厚壁菌门菌株基于 16S rRNA 基因序列构建的系统发育树Figure 2.2.1 Phylogenetic tree constructed from 16s rRNA gene sequences of 8 Firmicutes strains
【参考文献】

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本文编号：2873984