淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白的原核表达及结合特性研究

发布时间：2024-11-05 07:49

　　淡足侧沟茧蜂Microplitis pallidipes Szepligeti是一种重要的害虫天敌,主要寄生夜蛾科害虫里的中低龄幼虫。本研究针对得到的淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白Mp OBP8和Mp OBP10,运用相关生物信息学软件对它们与其他物种的气味结合蛋白进行了序列相似性比对及亲缘关系推断。并成功构建了p ET28a(+)-Mp OBP8、p ET32a(+)-Mp OBP8、p ET28a(+)-Mp OBP10及p ET32a(+)-Mp OBP10原核表达载体,通过对Mp OBP8原核表达条件的优化调整,探索出了它的最优表达条件,获得了含量较高的该气味结合蛋白;对Mp OBP10基因进行了原核表达研究。为后期研究Mp OBP8和Mp OBP10的对化学物质的识别分子机理夯实了基础。主要结果如下:1.淡足侧沟茧蜂Mp OBP8与膜翅目昆虫中红侧沟茧蜂Mm OBP8的亲缘关系最近。Mp OBP10与毁侧沟茧蜂Microplitis demolitor的Md OBP72的进化关系最近,其次是中红侧沟茧蜂的Mm OBP10。Mp OBP8和Mp OBP10与直翅目、鳞翅目、双翅目、鞘翅...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 文献综述
        1.1.1 昆虫气味结合蛋白的基本理化特性
            1.1.1.1 物理特性
            1.1.1.2 化学特性
        1.1.2 昆虫气味结合蛋白的表达特性
            1.1.2.1 表达部位
            1.1.2.2 表达量
        1.1.3 昆虫气味结合蛋白的生理功能
            1.1.3.1 对特异气味分子的识别和结合
            1.1.3.2 结合、运载特定气味分子
            1.1.3.3 迅速失活气味分子
    1.2 实用价值与理论意义
第二章 淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白MPOBP8和MPOBP10的相关序列比对和进化分析
    2.1 材料与方法
    2.2 结果与分析
        2.2.1 淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白MpOBP8和MpOBP10的氨基酸序列与其他物种OBPs的相似性比对
        2.2.2 淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白MpOBP8和MpOBP10的进化树分析
    2.3 讨论
第三章 淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白MPOBP8和MPOBP10的原核表达
    3.1 材料和方法
        3.1.1 试验材料
            3.1.1.1 甜菜夜蛾和淡足侧沟茧蜂
            3.1.1.2 主要仪器及试剂
        3.1.2 基本方法
        3.1.3 原核表达载体的构建
        3.1.4 融合表达载体的鉴定
        3.1.5 阳性重组质粒转化BL21(DE3)菌株
        3.1.6 诱导表达目的蛋白
        3.1.7 SDS-PAGE分析
    3.2 结果与分析
        3.2.1 pET28a(+)-MpOBP8融合表达载体的构建和表达
            3.2.1.1 pET28a(+)-MpOBP8融合表达载体的构建
            3.2.1.2 pET28a(+)-MpOBP8融合表达载体的表达
        3.2.2 pET28a(+)-MpOBP10融合表达载体的构建和表达
            3.2.2.1 pET28a(+)-MpOBP10融合表达载体的构建
            3.2.2.2 pET28a(+)-MpOBP10融合表达载体的表达
        3.2.3 pET32a(+)-MpOBP10融合表达载体的构建和表达
            3.2.3.1 pET32a(+)-MpOBP10融合表达载体的构建
            3.2.3.2 pET32a(+)-MpOBP10融合表达载体的表达
        3.2.4 pET32a(+)-MpOBP8融合表达载体的构建和表达
            3.2.4.1 pET32a(+)-MpOBP8融合表达载体的构建
            3.2.4.2 pET32a(+)-MpOBP8融合表达载体的表达
    3.3 讨论
第四章 PET32A(+)-MPOBP8原核表达条件优化及纯化浓缩
    4.1 材料与方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 结果与分析
        4.2.1 诱导温度的优化
        4.2.2 诱导时间的优化
        4.2.3 IPTG诱导浓度的优化
        4.2.4 加入IPTG时机的优化
        4.2.5 纯化与浓缩
    4.3 讨论
第五章 荧光竞争结合实验
    5.1 材料与方法
        5.1.1 供试材料
        5.1.2 供试方法
            5.1.2.1 重组气味结合蛋白MpOBP8荧光特征
            5.1.2.2 MpOBP8与气味化合物的结合试验
    5.2 结果与分析
    5.3 讨论
结论与展望
参考文献
攻读硕士期间发表的论文
致谢



本文编号：4011466