信号分子AI-2的体外合成及其对副溶血性弧菌四环素耐药性的调控作用

发布时间：2022-01-26 06:33

　　【背景】抗菌药的过度使用引起细菌耐药性日益严重,作为重要的食源性致病菌,副溶血性弧菌也表现出一定程度的耐药性。群体感应系统可以调控细菌的耐药性,为研究副溶血性弧菌的耐药机制和控制技术提供新的途径。【目的】探讨群体感应信号分子AI-2 （autoinducer-2）对海产品中分离的副溶血性弧菌四环素耐药性的调控作用。【方法】通过原核表达制备AI-2合成关键酶——S-核糖同型半胱氨酸酶（S-ribosylhomocysteinase, LuxS）和S-腺苷同型半胱氨酸核苷酶（S-adenosylhomocysteinenucleosidase,Pfs）,体外合成AI-2,通过菌落计数法分析AI-2对副溶血性弧菌在四环素亚抑菌浓度下耐受性的影响,采用逆转录实时荧光定量PCR法测定不同浓度AI-2对副溶血性弧菌四环素耐药基因转录水平的影响。【结果】通过原核表达获得LuxS和Pfs,作用于底物S-腺苷同型半胱氨酸能合成具有生物活性的AI-2,其荧光强度约为阳性对照的6倍。在四环素亚抑菌浓度下,AI-2能显著促进副溶血性弧菌的生长,6、15、30μmol/L浓度AI-2能不同程度地提高副溶血性弧菌... 

【文章来源】：微生物学通报. 2020,47(05)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

重组LuxS和Pfs的纯化

体外合成AI-2的活性

测定了0、10、20、40、60、80、100μmol/L浓度的同型半胱氨酸分别与Ellman’s试剂反应后的吸光值，绘制了用于计算AI-2浓度的标准曲线(图3)。纯化的LuxS和Pfs蛋白作用于SAH底物的反应液经超滤后，测得浓度约为330μmol/L，用V.harveyi BB170检测到反应液的活性约为阳性对照的6倍，表明合成了具有生物学活性的AI-2(图4)。图2 重组LuxS和Pfs的纯化

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：3609996