环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力
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环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力
论文目录
摘要第1-8页
ABSTRACT第8-16页
第一章 绪论第16-48页
·结核病的危害与困境第16-17页
·结核病的发病机理第17-20页
·致病菌与传播方式第17-18页
·发病机理第18-20页
·MTB的遗传学基础第20-21页
·MTB重要致病因子第21-28页
·脂和脂肪酸代谢基因第21-22页
·氨基酸和嘌呤合成基因第22-23页
·金属摄取基因第23页
·厌氧呼吸和氧化压力蛋白第23-24页
·转录调控因子第24-25页
·响应调节因子第25-26页
·其它毒力因子第26-28页
·MTB潜伏感染与休眠第28-29页
·潜伏感染与休眠第28页
·Wayne厌氧模型第28-29页
·三元信号系统DosR/DosS/DosT与休眠调控第29-36页
·DosR系统的发现和组成第29-33页
·有氧呼吸与休眠程序第33页
·氧气和氧化还原压力感应第33页
·DosR系统作用机理第33-35页
·休眠程序在巨噬细胞和动物感染中的作用第35-36页
·细菌核酸类胞内二级信使第36-38页
·C-di-GMP信号转导第38-46页
·C-di-GMP合成与降解第40页
·C-di-GMP调控单元的信号输入第40-41页
·C-di-GMP受体介导信号传递第41-44页
·c-di-GMP信号转导的靶标和受其影响的胞内过程第44-45页
·GGDEF和EAL结构域蛋白的多样性第45页
·C-di-GMP控制单元的时空隔离第45页
·酶学失活的GGDEF和EAL蛋白第45-46页
·本课题的研究目的第46页
·本课题研究的技术路线第46-48页
第二章 环二鸟苷酸信号转导调控结核杆菌休眠、生物膜发育和毒力第48-102页
·引言第48-49页
·实验材料与方法第49-70页
·实验菌株与载体第49-52页
·实验所用引物第52-55页
·试剂第55-56页
·培养基第56-57页
·主要仪器及材料第57-58页
·实验用细胞和动物第58页
·E.coli感受态细胞制备第58页
·E.coli感受态热击转化第58页
·MTB基因组提取第58-59页
·基因敲除质粒构建第59-60页
·基因回补质粒构建第60页
·MTB电转化感受态细胞制备第60-61页
·基因敲除质粒线性化第61页
·基因敲除突变株构建第61-62页
·敲除突变株的基因回补第62-63页
·MTB RNA抽提第63页
·Microarray分析第63-64页
·生物信息学预测基因功能第64页
·RNA逆转录第64页
·实时荧光定量PCR第64页
·THP细胞感染实验第64-65页
·小鼠感染模型第65页
·脾肺脏切片与HE染色第65-66页
·DNA染色和荧光素酶活体染色第66页
·生物膜形成第66-67页
·MTB体外低氧生长模型第67页
·NAD和NADH分析第67-68页
·蛋白重组表达第68页
·蛋白纯化第68-69页
·c-di-GMP合成酶活性分析第69页
·吡啶血色原分析第69-70页
·实验结果第70-93页
·生物信息学预测MTB中可能的c-di-GMP合成酶和降解酶第70页
·Rv1354c和Rv1357c的重组表达第70-71页
·Rv1354c和Rv1354-GG具有c-di-GMP合成酶活性第71-72页
·GAF结构域感应氧化还原压力调控c-di-GMP合成活力第72-74页
·c-di-GMP合成酶和降解酶基因敲除与回补第74-76页
·c-di-GMP合成酶基因缺失不影响MTB正常生长第76-77页
·全基因转录谱分析第77-82页
·定量RT-PCR验证中后期培养物的休眠基因表达第82页
·c-di-GMP调控MTB生物膜发育第82-84页
·c-di-GMP合成酶缺失导致MTB的正常生长需消耗更多氧气第84页
·胞内氧化还原平衡需要c-di-GMP合成酶第84-85页
·c-di-GMP调控MTB休眠的存活和生长恢复能力第85-86页
·c-di-GMP合成酶缺失引起低氧条件下休眠基因下调表达第86-87页
·c-di-GMP受体预测第87页
·H37Rv基因敲除突变株筛选第87-88页
·基因敲除引起细胞免疫因子表达改变第88-90页
·Rv1357c缺失导致小鼠脾肺炎症增强和感染后期细菌存活力严重下降第90-92页
·Rv0195缺失导致MTB的小鼠致病力和感染后期细菌存活力严重下降第92-93页
·讨论第93-102页
参考文献第102-118页
附录第118-120页
致谢第120-122页
博士在读期间发表的学术论文与取得的研究成果第122页
发表论文第122页
申请专利第122页
主持项目第122页
论文编号BS2225719,这篇论文共122页
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