重楼单体PP-22抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖分子机制与不同温度干预研究

发布时间：2020-05-04 11:35

【摘要】：目的本研究探讨重楼单体PP-22诱导CNE-2细胞凋亡与自噬发生的分子机制及不同温度联合药物作用CNE-2细胞的凋亡、克隆形成能力情况,旨在为临床工作中对鼻咽癌放疗后患者的用药护理工作明确其更深层次的机理,同时为指导临床上运用护理措施来缓解放疗后出现口腔黏膜肿痛等并发症的护理工作进行深层次的分子机制研究提供思路和理论支撑。方法用不同浓度的PP-22按时间梯度作用于鼻咽癌CNE-2细胞株,MTT方法和EDU掺入法检测PP-22对CNE-2细胞增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染色法检测PP-22对CNE-2细胞的凋亡水平;Hoechst 33258染色法检测PP-22对鼻咽癌CNE-2细胞形态学的变化;激光共聚焦显微镜术免疫荧光方法观察LC3点状聚集;Western blot检测PP-22作用于CNE-2细胞状态下的凋亡与自噬相关蛋白表达水平的变化;p38 MAPK激酶及其下游蛋白的表达水平变化;内质网应激ER-stress的相关蛋白表达水平的变化和Stat3转录因子及其下游相关蛋白的表达水平变化。运用冷热疗法的原理,设置不同温度状态下,检测PP-22对CNE-2细胞的凋亡影响与克隆形成能力的影响。结果MTT结果显示,随着药物浓度时间梯度的增加,PP-22对CNE-2细胞增殖抑制作用呈明显的剂量依赖性及时间依赖性。EDU检测结果进一步说明PP-22抑制CNE-2细胞的增殖。Annexin V-FITC/PI双染色法检测结果显示,随着PP-22浓度的增加,CNE-2细胞的凋亡比例也逐渐增加,在0μM到4μM的时候,凋亡率从6.67%增加到23.18%。Hoechst 33258染色显示在PP-22的作用下,细胞核出现固缩、裂解、部分形成凋亡小体。Western blot实验结果显示PP-22作用下,CNE-2细胞凋亡相关蛋白表达水平发生变化,凋亡抑制蛋白Bcl-2,Bcl-xL表达减少,促凋亡蛋白Bax,Bak表达基本不变;caspase 3,caspase 9,PARP表达减少,cleaved-caspase 3,cleaved-caspase 9,cleaved-PARP表达增加;Western blot实验结果显示随着PP-22浓度的增加,PERK,BIP,PDI,EROL-LA,IRE-LA,CHOP,Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平逐渐增加,p62水平逐渐下降,CNE-2细胞自噬增加。激光共聚焦显微镜术观察LC3出现点状聚集。p-ERK1/2表达减少,p-p38表达水平增加,ERK,JNK,p-JNK和p38表达水平不变。p-Stat3(Tyr705)、c-Myc、Mcl-1、Bcl-2和CyclinD1表达减少。不同温度孵育实验结果显示,在相同药物浓度作用下39℃和34℃孵育CNE-2细胞的凋亡率比37℃孵育的凋亡率都要高;34℃细胞克隆形成能力明显比37℃的克隆形成能力要低,而39℃与37℃相比,克隆形成能力则没有区别。结论PP-22对CNE-2细胞有抑制增殖的作用,通过抑制Jak/Stat3通路和ERK MAPK激酶;激活p38,ER-stress,这三个信号通路共同调节诱导CNE-2细胞发生凋亡与自噬。不同温度孵育能影响CNE-2细胞的凋亡率与克隆形成能力,研究结果可为进一步的临床护理研究提供参考和依据。
【图文】：

PP-22抑制CNE-2细胞增殖（与空白对照组相比，**P＜0.01，***P＜0.001）

重楼单体PP-22抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖分子机制与不同温度干预研究

PP-22抑制CNE-2细胞的DNA复制比例尺=100μmFigure3.2PP-22inhibitstheDNAreplicationofCNE-2cells.Scalebar=100μm.
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R473.73

【参考文献】