江苏省泰兴市健康人群鼻腔金黄色葡萄球菌携带情况及耐药和分子特征研究

发布时间：2020-05-04 18:59

【摘要】：背景:金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌的代表,可引起严重感染,包括鼻窦炎、肺炎、心内膜炎、骨髓炎等,病死率高达20%。近年来由于抗生素的不合理使用与销售,细菌耐药性问题日益显著,耐药菌株传播速度急剧加快,给人体带来潜在的健康威胁。然而80%的金葡菌感染来源于患者入院前鼻腔或皮肤表层的金葡菌携带。金葡菌在健康人群中的定植是造成社区和医院金葡菌感染和耐药传播的重要危险因素。目前国内外针对金葡菌的研究多集中在医院内部而较少关注健康人群金葡菌的携带情况,因此,不利于感染来源的探究及防控措施的制定,强调我们需要对健康人群携带的金葡菌进行研究。目的:1.了解江苏省泰兴市健康人群中金黄色葡萄球菌携带情况。2.掌握江苏省泰兴地区健康人群携带金黄色葡萄球菌菌株的耐药现状,并对相关耐药基因进行检测,为临床用药及预防控制耐药菌株感染提供科学依据。3.观察江苏省泰兴地区健康人群携带金黄色葡萄球菌的分子特征。4.探讨健康人群携带不同分子型别的金黄色葡萄球菌与感染风险及耐药性获得之间的关系,并阐述对耐药菌株传播可能带来的影响。方法:1.2016年6月7日至2016年6月14日,按0、3、7天时间间隔对144名泰兴市本地18-65岁常住成年健康人群进行鼻腔拭子标本采集。2.参照GB/T 4789.37-2008标准,采用Baird-Parker平板法对鼻腔拭子标本进行金黄色葡萄球菌计数,挑选可疑菌株并通过血浆凝固酶试验和Vetck-2生化试验进行鉴定。根据3次采集的鼻腔拭子标本生化鉴定和菌落计数结果,将携带金黄色葡萄球菌人群分为长期定植、间歇定植和未确定定植状态三个组别。3.参照美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standard Institute,CLSI)标准,选用K-B纸片法(K-B Disk Diffusion test)对临床常用的24种抗菌药物进行耐药性研究。4.采用PCR方法对金黄色葡萄球菌多种耐药基因携带情况进行筛查,并对甲氧西林耐药基因进行mec A基因分型。5.运用金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal protein A,SPA)基因多态性分型、多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)、多位点串联重复序列分析(Multiplelocus variable number tandem repeat analysis,MLVA)三种分子分型方法对江苏省泰兴市健康人群中分离出的金黄色葡萄球菌进行分子分型并与国内外流行菌株进行对比分析。结果:1.健康人群鼻腔中普遍携带金黄色葡萄球菌。本研究发现金黄色葡萄球菌的阳性携带率最高为20.83%。长期定植者在整个研究人群中占比8.33%,间歇定植者占比17.36%,仍有74.31%未确定定植状态。金葡菌长期定植者中鼻腔菌落计数高达106 CFU。2.健康人群鼻腔提取的金葡菌对对β-内酰胺类抗生素,红霉素,替考拉宁耐药水平较高,对氨基糖苷类、喹诺酮类、化学合成类等药物耐药检出率较低,未发现利奈唑胺、利福平、莫匹罗星和万古霉素耐药菌株,多重耐药情况严重。长期定植者与间歇定植者耐药情况相比,未发现长期定植者中更高的耐药种数。3.健康人群携带的金葡菌分子型别分布较为广泛。长期定植者鼻腔金葡菌定植的分子型别相对固定,而间歇定植者易发生变化,且伴随着不同耐药程度金葡菌定植的变化。4.本研究发现23株mec A阳性菌株,SCCmec I型、II型和III型均出现在间歇定植者中(HA-MRSA)。长期定植者中已分型的SCCmec型别均为IV(CA-MRSA),三次采样分型未发生变化。5.本研究发现健康人群中10种MRSA耐药分子模式。长期定植者中两种MRSA耐药分子模式分别为t015-ST508-SCCmec IV和JS-8-ST1920-SCCmec IV。间歇定植者中8种MRSA耐药分子模式:t437-ST59-SCCmec I,t437-ST59-SCCmec III,t437-ST59-SCCmec IV,t015-ST508-SCCmec IV,t616-ST944-SCCmec II,t5554-ST630-SCCmec III,t377-ST630-SCCmec II,t4549-ST630-SCCmec III。结论:1.健康人群中金葡菌携带状况较为普遍,不同的定植状态及分子型别对金葡菌耐药性的产生和耐药菌株的传播具有重要的影响。2.本研究未在长期定植人群中发现较高的多重耐药现象,提示定植状态可能与多重耐药无关。3.本研究发现对健康人群进行mec A基因分型,能够预测携带不同SCCmec型别感染的来源和潜在的风险,不同定植状态可能存在SCCmec型别上的潜在机制。4.本研究未在健康人群中发现引起我国院内MRSA感染的主要耐药分子模式。
【图文】：

鼻腔,采样方法,示例,人造丝

VITEK2 全自动微生物鉴定及药敏分析系统麦氏比浊仪法国梅里埃公司法国梅里埃公司.3 方法.3.1 鼻腔标本采集方法按 0、3、7 天时间间隔对志愿者进行鼻腔拭子标本采集。引导受试者平躺于床或沙发上，用手轻轻固定住受试者的头部，使其头部保持微姿态。将一支人造丝拭子轻轻插入受试者左侧鼻道内的鼻前庭处，顺时针方向和逆时针交替缓慢转动 15 秒后取出。将采样后的人造丝拭子插入装有 1mL 0.85%无菌生水的样品保存管中，长于保存管的部分掰断丢弃，拧紧管盖。另取一支人造丝拭子，采集右侧鼻腔拭子，，方法与左侧相同，并将左右鼻腔拭子置于同一样品保存管中，拧紧管盖，静置于室温备用。

定植,金葡菌,志愿者,与非

图 1-2. 金葡菌长期定植与非志愿者中，最终有 144 名完成了整资料见表 1-2。在这些志愿者中，三菌阳性携带者，107 名未检测出金样本量较少，未进行统计学分析。表 1-2. 志愿者人口学基金葡菌阳性（n=37） 45（18-61） 16/37（43.2%） 21/37（56.8%） 25.1（20.6-35.5）
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R446.5

【参考文献】