Spexin对小鼠痛觉的影响及机制研究

发布时间：2020-06-01 13:03

【摘要】：背景Spexin(SPX)又称神经肽Q,是一种新发现的内源性神经肽。人Spexin前原肽由基因组12号染色体上C12orf29基因编码。Spexin的氨基酸序列在脊椎动物中高度保守,Spexin基因和蛋白在人及啮齿类动物的中枢神经系统和外周组织中广泛表达。Spexin参与调节多种生理功能,包括摄食、胃肠运动、能量代谢、葡萄糖及脂质代谢等。Spexin免疫阳性细胞在啮齿动物的脑干,三叉神经节和大脑皮层等与疼痛信号传递密切相关的区域有分布,这表明Spexin可能与疼痛有关。本实验通过应用福尔马林诱导的急性炎症痛和乙酸诱导的内脏痛两种模型,采用行为学检测、qRT-PCR、Western blot、免疫组织化学等实验方法研究Spexin在急性痛模型中的镇痛作用及其机制。福尔马林致痛模型可模拟人类损伤后疼痛的某些特征,具有很好的重复性,被广泛应用于疼痛机制的研究。乙酸诱导的内脏痛是研究中枢和外周疼痛的常用模型。目的探讨Spexin对小鼠痛觉的影响。方法(1)采用福尔马林炎症痛小鼠模型,通过侧脑室注射Spexin、Galr2、Galr3、KOR和MOR拮抗剂,检测小鼠的痛觉行为;(2)侧脑室注射Spexin或拮抗剂后,取脑组织,提mRNA,反转录得到cDNA,用qPCR检测Galr2、Galr3、Adcy1-9、Pomc、Penk、Pdyn、Oprm1、Oprd1、Oprk1、c-Fos、Jun和Egr1 mRNA水平;(3)Spexin注射后,取脑组织,提蛋白,用Western blot检测KOR的表达水平;(4)Spexin注射后,灌注,固定,组织包埋,切片,免疫组织化学检测中脑导水管周围灰质区(PAG)内c-Fos阳性细胞数目;(5)在乙酸诱导的内脏痛小鼠模型中,检测侧脑室注射Spexin(0.081-2.43 mg/kg)对小鼠扭体反应次数的影响,qRT-PCR检测脑组织Galr2、Galr3、Adcy1-9、Pomc、Penk、Pdyn、Oprm1、Oprd1、Oprk1、Gabra1-5、c-Fos、Jun、Egr1 mRNA水平。结果(1)在福尔马林炎症痛小鼠模型中,0.81 mg/kg和2.43 mg/kg Spexin可显著缩短小鼠在第I时相第(早期时相,0-10 min)的舔/咬后爪时间,2.43 mg/kg Spexin显著减少第II时相(晚期时相,10-30 min)舔/咬的时间,阳性对照甘丙肽GAL(0.32 mg/kg)在第I时相和第II时相均明显缩短小鼠舔/咬后爪时间;(2)qRT-PCR结果显示,侧脑室注射Spexin能显著提高Galr3及Galr3下游Adcy4mRNA水平,并且Galr3拮抗剂SNAP37889(0.018 mg/kg)能够阻断Spexin在福尔马林炎症痛模型中的镇痛作用,说明Spexin的镇痛作用是通过Galr3介导的;(3)阿片受体拮抗剂nor-BNI(73.47 mg/kg)能阻断Spexin(2.43 mg/kg)的镇痛反应;qRT-PCR结果显示Spexin提高了Pdyn和Oprk1 mRNA水平,但不影响Pomc、Penk、Oprm1和Oprd1 mRNA水平;Western blot结果显示Spexin显著提高了KOR蛋白的表达,这表明Spexin的镇痛作用是通过Pdyn/KOR实现的;(4)Spexin显著提高了小鼠脑组织c-Fos mRNA水平;c-Fos抑制剂T-5224(100mg/kg)能够拮抗Spexin诱导的Pdyn和Oprk1 mRNA升高;免疫组织化学技术结果显示Spexin(2.43 mg/kg)能显著增加尾侧(前囟-4.9 mm)PAG背内侧、端侧和腹外侧c-Fos阳性细胞个数;表明Spexin的镇痛作用与c-Fos有关;(5)在乙酸诱导的内脏痛模型中,Spexin能够显著减少小鼠扭体反应次数,qRT-PCR结果显示Spexin提高Galr2、Adcy1、Pomc、Oprm1、c-Fos mRNA水平。结论1侧脑室注射Spexin(0.81,2.43 mg/kg)在福尔马林致小鼠急性炎症痛模型中具有明显镇痛作用,该作用是通过Galr3/Adcy4/FOS/Pdyn/KOR路径实现的;2中枢Spexin(0.81,2.43 mg/kg)在乙酸诱导的内脏痛小鼠模型中发挥镇痛作用,该作用与Galr2、Adcy1、c-Fos、Pomc、Oprm1基因有关。
【图文】：

观察30 min内小鼠第I时相（0-10 min）和第II时相（10-30 min）舔/咬爪时间。在第I时相（图3-1A），Spexin0.81 mg/kg和2.43 mg/kg可显著缩短小鼠的舔/咬时间（P<0.01，P<0.001），低剂量组（Spexin 0.081 mg/kg）与对照组相比无明显差异（P=0.80）。在第II时相（图3-1B），与对照组比较，2.43 mg/kg的Spexin，小鼠的舔/咬时间显著减少（P<0.05），，在0.081或0.81mg/kg剂量（0.081 mg/kg，P=0.97；0.81 mg/kg
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R402

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 丁济飞;邓云坤;;褪黑素在带状疱疹后神经痛中的镇痛作用及其可能机制[J];中国疼痛医学杂志;2015年06期

2 罗敬华;曾晓艳;范桂香;袁育康;王军阳;;葛根素对神经病理性痛模型小鼠的镇痛作用[J];西北药学杂志;2013年01期

3 张文华;江剑平;;阿片类物质的外周镇痛作用[J];福建师范大学学报(自然科学版);2011年02期

4 高立新;;苦味西葫芦水提物镇痛作用的实验研究[J];临床医药实践;2009年17期

5 梁生林;温定文;肖红铃;孟凡利;李正红;余海红;刘亿婕;;地锦草煎剂对小鼠的镇痛作用[J];中国医院药学杂志;2009年23期

6 姚婉霞;周俊俊;闫琳;金少举;蒋袁絮;;氧化槐定碱镇痛作用及其机制研究[J];中草药;2008年04期

7 余静;;辣椒素提取及镇痛作用研究进展[J];粮食与油脂;2008年08期

8 刘永平,佟继铭;野罂粟碱镇痛作用及其机制研究(英文)[J];中国临床康复;2005年24期

9 李晓丽,张少华,秦林,宋振华,毛淳,张勤生;川乌与防己配伍镇痛作用的实验研究[J];中国中西医结合杂志;2000年03期

10 徐龙河;异丙酚的镇痛作用[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;1999年01期

相关会议论文 前10条

1 王瑞昙;岳明;郭琦;张恩户;;解表药镇痛作用的文献再评价[A];中华中医药学会中药实验药理分会第八届学术会议论文摘要汇编[C];2009年

2 林青;杨莲;段小花;李秀芳;马云淑;;克班宁的镇痛作用机制探讨[A];中华中医药学会中药实验药理分会第八届学术会议论文摘要汇编[C];2009年

3 刘红艳;王海燕;李云鸿;蒋袁絮;余建强;;氧化苦参碱对神经病理性疼痛的镇痛作用及其机制[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年

4 周俊俊;蒋袁絮;金少举;陶丽君;刘利军;;甘珀酸钠苦参素包合物镇痛作用及部位研究[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年

5 杨丽;邓扬鸥;吴世星;吕晓强;刘永刚;;苦参碱镇痛作用及其阿片受体非相关性的研究[A];第四次中华中医药科技成果论坛论文集[C];2014年

6 张芬;祝慧凤;薛莉君;罗伟;张茂芸;;瓦松镇痛作用研究[A];全国第3届临床中药学学术研讨会论文集[C];2010年

7 吕晓强;邓扬鸥;杨丽;侯平;姜静;;氧化苦参碱镇痛作用的研究[A];“新成果·新进展·新突破”中华中医药学会2013年学术年会、第三次中华中医药科技成果论坛论文集[C];2013年

8 黄家诏;谢金鲜;黄显文;李爱媛;梁红;;虎威伤痛灵抗炎、消肿和镇痛作用的实验研究[A];仲景医学求真（续一）——中华中医药学会第十五届仲景学说学术研讨会论文集[C];2007年

9 宋静静;田野;赵敏;闫国栋;;复方鼠妇镇痛作用的研究[A];泛环渤海地区九省市生物化学与分子生物学会——2011年学术交流会论文集[C];2011年

10 周汝俊;周智;杨健;吕辉章;黄敬耀;陈涟如;;黄甲棒镇痛作用研究[A];中华口腔医学会成立大会暨第六次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];1996年

相关重要报纸文章 前10条

1 杨建;中药冰片外用镇痛作用机制获证实[N];中国中医药报;2017年

2 记者 刘海英;扑热息痛镇痛作用机制被发现[N];科技日报;2011年

3 吴勐；王银叶；艾铁民;紫金龙镇痛作用与阿片受体无关[N];中国医药报;2005年

4 瞿燕 秦旭华 潘晓丽;成都中医药大学研究表明:醋艾叶炭有止血镇痛作用[N];中国医药报;2006年

5 何瑶;止痛消炎好及时[N];医药经济报;2003年

6 何瑶;止痛降温 安全有效[N];医药经济报;2002年

7 王子平;以充分公开换专利保护[N];中国知识产权报;2001年

8 孙琳婧;“笑”里藏刀[N];中国医药报;2018年

9 张揆一;介绍四种催人入眠的食物[N];家庭医生报;2008年

10 蓝天;催眠不妨试一下食物[N];卫生与生活报;2007年

相关博士学位论文 前10条

1 陈卉;治疗PHN元全片的制备工艺及其镇痛作用机制研究[D];广州中医药大学;2016年

2 郭平;中药七情配伍的研究[D];成都中医药大学;2004年

3 董英伟;辣椒辣素镇痛作用及安全性的研究[D];黑龙江中医药大学;2003年

4 李元海;呱氨托美汀镇痛和胃保护作用及其部分机制的研究[D];安徽医科大学;2004年

5 冯宇鹏;神经降压素在大鼠脊髓背角的镇痛作用及其机制[D];第四军医大学;2005年

6 秦晓辉;胍丁胺对炎性疼痛的镇痛作用及其机制的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年

7 宋志扬;胆碱能系统参与SCS镇痛作用机制的实验研究[D];吉林大学;2006年

8 李淑慧;N-乙酰-5-甲氧色胺的镇痛作用及其机制研究[D];第三军医大学;2003年

9 樊惠;GLP-1受体非肽类激动剂镇痛作用及其机制的研究[D];上海交通大学;2015年

10 林思芳;麻醉药镇痛作用机制的功能性磁共振成像研究[D];中国协和医科大学;2008年

相关硕士学位论文 前10条

1 张晓梅;Spexin对小鼠痛觉的影响及机制研究[D];河南大学;2019年

2 罗雅范;外源性催产素在周围神经系统的镇痛作用研究[D];昆明医科大学;2018年

3 徐婷婷;氧化槐果碱的镇痛作用及相关机制的研究[D];宁夏医科大学;2013年

4 李记争;氧化苦参碱的镇痛作用及其与GABA能神经系统相关机制的研究[D];宁夏医科大学;2011年

5 周俊俊;甘珀酸钠苦参素包合物镇痛作用及相关机制的研究[D];宁夏医学院;2008年

6 宋小平;映山红总黄酮的镇痛作用及其作用机理[D];安徽医科大学;2006年

7 王利明;异丙酚的镇痛作用及其机理研究[D];苏州大学;2002年

8 丁晓兰;中华眼镜蛇毒不同剂型和给药途径的镇痛作用研究[D];苏州大学;2013年

9 盛尊来;落新妇生药学及其根镇痛作用有效部位的研究[D];黑龙江中医药大学;2006年

10 于桂杰;骶管内伍用新斯的明对吗啡在小儿术后镇痛作用的影响[D];中国医科大学;2003年

本文编号：2691523