光滑念珠菌MSH2基因突变与氟康唑耐药的研究分析

发布时间：2020-09-09 14:45

　　 第一部分耐氟康唑光滑念珠菌MSH2基因突变分析中文摘要目的分析临床分离157株光滑念珠菌对5种抗真菌药物的耐药率,同时探讨临床分离的光滑念珠菌MSH2基因突变与氟康唑耐药的关系。方法收集2017年7月-2018年7月安徽医科大学第一附属医院检验科从临床标本分离获得的157株光滑念珠菌,并对5种抗真菌药物的抗性进行统计。从上述菌株中随机挑取19株氟康唑耐药菌株、15株剂量依赖性敏感(S-DD)菌株以及23株敏感菌株,用微量稀释法对药物敏感性进行验证,对MSH2基因进行Sanger测序检测,并将测序结果与Gen Bank中已发表的序列进行比对,分析每组MSH2基因突变频率及相关突变位点。结果157株光滑念珠菌对伊曲康唑耐药率最高,为27.4%,对氟康唑耐药率为22.9%,对伏立康唑、两性霉素B耐药率分别为5.7%、2.5%,所有菌株对5-氟胞嘧啶不耐药。与敏感组比较,耐药组、S-DD组MSH2基因突变频率显著升高,差异有统计学意义(P0.0167)。检测到MSH2基因存在G622A/A2669T、G715T这3个突变位点,对应P208S/N890I、V239L 3个氨基酸置换位点;且P208S/N890I仅出现在耐药菌株中。结论临床分离的光滑念珠菌对唑类耐药率比两性霉素B、5-氟胞嘧啶高;光滑念珠菌MSH2基因突变与氟康唑耐药有一定关系。第二部分光滑念珠菌MSH2基因m RNA水平的分析目的探讨临床分离的光滑念珠菌MSH2基因m RNA水平与氟康唑耐药的关系,进一步探讨MSH2基因突变与氟康唑耐药的关系。方法将第一部分实验菌株的19株氟康唑耐药菌株与23株敏感菌株,通过超声波细胞破碎机破壁,Trizol试剂提取总RNA,以标准菌株ATCC MYA-2950为对照组,实时荧光定量PCR方法检测实验菌株MSH2基因m RNA的相对量,使用统计学原理,分析光滑念珠菌MSH2基因m RNA的相对量在氟康唑耐药组与敏感组之间是否存在统计学意义,同时MSH2基因突变组与未突变组之间的MSH2基因m RNA的相对量是否有统计学差异。结果通过实时荧光定量PCR扩增每个实验菌株,氟康唑耐药组MSH2基因m RNA的相对量2-ΔΔCT值与敏感组比较,差异有统计学意义(P0.05),且在耐药组MSH2基因相对低水平转录;15株MSH2基因未突变菌株中,MSH2基因m RNA低水平的菌株所占百分比为33.33%(5/15),27株MSH2基因突变菌株中,MSH2基因m RNA低水平的菌株所占为88.89%(24/27),MSH2基因未突变组出现m RNA低水平的频率(33.33%)与MSH2基因突变组(88.89%)相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论氟康唑耐药与MSH2基因m RNA低水平有关,MSH2基因突变的菌株较多会出现MSH2基因低水平转录,这可能MSH2基因在光滑念珠菌耐药机制中发挥作用的分子基础。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R446.5
【部分图文】：

17图 1 MSH2 基因分段 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳结果Fig. 1 The results of agarose gel electrophoresis for PCR product of MSH geneA:MSH2 基因片段 1;B:MSH2 基因片段 2;C:MSH2 基因片段 3;M：DNA Marker，

图 2 基因突变位点及氨基酸序列比对图Fig. 2 Gene mutation site and amino acid sequence alignment map19 株氟康唑耐药菌株有 17 株发生 MSH2 基因突变，2 株未出现 MSH变非同义突变，其中涉及 C622T/ A2669T 突变 2 株，涉及 G715T 突变 1

MSH2基因、ACT1基因扩增曲线

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 方小龙;资捷;陈志芳;王莉平;;阴道光滑念珠菌耐药性及氟康唑耐药相关基因的表达[J];国际检验医学杂志;2012年13期

2 郭红,邹全明;四种检测光滑念珠菌方法的比较[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2000年06期

3 冯晓博;姚志荣;廖万清;;光滑念珠菌及其相似种的鉴定、流行病学和抗真菌药物敏感性研究[J];中华实验和临床感染病杂志(电子版);2013年01期

4 席丽艳;;对唑类药物耐药的光滑念珠菌所致的顽固性外阴阴道念珠菌病的治疗[J];国外医学.皮肤性病学分册;1993年06期

5 毕建虹;;全身感染光滑念珠菌与白念珠菌的小鼠免疫应答和致病性的比较[J];国外医学(微生物学分册);2002年03期

6 刘锦燕;王影;李文静;赵悦;孟玲宁;朱巍巍;史册;项明洁;;体外氟康唑诱导光滑念珠菌和近平滑念珠菌耐药及相关机制研究[J];诊断学理论与实践;2017年05期

7 席丽艳,鲁长明,谢穗生;一种快速鉴定光滑念珠菌与热带念珠菌的方法[J];中国麻风皮肤病杂志;2001年04期

8 李鑫;刘笑芬;;CANDIPOP:用氟康唑对光滑念珠菌血症患者进行初始治疗是否有效[J];中国感染与化疗杂志;2017年03期

9 沈银忠;张永信;;光滑念珠菌的流行现状与耐药机制[J];中国感染与化疗杂志;2010年01期

10 单艳华;张勇刚;王喜梅;;医院内深部真菌感染的临床分析[J];医药论坛杂志;2012年06期

相关会议论文 前8条

1 郭庆铃;孙红英;张慧;;姜黄素对氟康唑抗耐药光滑念珠菌的作用初探[A];2018年中华口腔医学会第十次全国口腔黏膜病学术大会暨第八次全国口腔中西医结合学术大会论文集[C];2018年

2 席丽艳;鲁长明;谢穗生;;海藻糖法快速鉴定光滑念珠菌与热带念珠菌[A];2001年中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2001年

3 卢伟;卢洁;冉玉平;林昭春;崔凡;万慧颖;潘宁;宋翔;陈金;王有为;余梅;曹泸丹;;国内首例伞枝犁头霉和光滑念珠菌所致皮肤感染[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年

4 郭鹏豪;廖康;周琦娴;陈怡丽;黄汉;;光滑念珠菌ERG11基因mRNA含量与氟康唑耐药性之间的关系[A];中华医学会第十二次全国临床微生物学术年会暨第十一次全球华人临床微生物学与感染症学术年会论文汇编[C];2015年

5 李治国;;103例危重患者下呼吸道念珠菌感染分析[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

6 郑小春;方晴霞;吕良忠;;2009-2011年我院真菌耐药性分析[A];2012年浙江省医学会临床药学学术年会暨医院药事管理质控中心、临床药学分会十周年庆典大会论文集[C];2012年

7 朱波;彭宇生;王鹏;;科玛嘉念珠菌显色培养基的临床应用评价[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

8 陈翠珠;徐英春;王澎;杨启文;谢秀丽;陈民钧;;1999～2005年北京协和医院真菌流行病学调查[A];第二届全国深部真菌感染学术会议论文集[C];2007年

相关博士学位论文 前2条

1 沈银忠;光滑念珠菌临床分离株对氟康唑耐药的机制研究[D];复旦大学;2008年

2 吴盘红;香莲方对咪康唑抗念珠菌增效作用的临床和实验研究[D];广州中医药大学;2013年

相关硕士学位论文 前10条

1 刘峗蕾;光滑念珠菌MSH2基因突变与氟康唑耐药的研究分析[D];安徽医科大学;2019年

2 赵莹;Dectin-1在热处理光滑念珠菌刺激大鼠气道上皮细胞中的免疫调节作用[D];桂林医学院;2017年

3 刘志广;光滑念珠菌对氟康唑耐药机制的研究[D];河北医科大学;2011年

4 王菡;烟曲霉菌对细胞的侵染机制及念珠菌PCR-SSCP分子流行病学技术的初步研究[D];西北大学;2008年

5 赵英男;血链素对三种念珠菌菌体细胞膜通透性及超微结构影响的研究[D];佳木斯大学;2014年

6 钟雪锋;院内获得性念珠菌血症的回顾性临床研究[D];北京协和医学院;2013年

7 王海燕;阴道念珠菌菌群分布及香莲外洗液抗光滑念珠菌活性研究[D];广州中医药大学;2012年

8 王维欣;黄连素等纯中药成分对氟康唑抗非白色念珠菌的增敏作用与机制研究[D];山东大学;2015年

9 李辉;氟康唑与他克莫司联合抗非白色念珠菌的作用与机制研究[D];山东大学;2014年

10 马虎;念珠菌性外阴阴道炎菌种的分布、快速鉴定法的研究[D];泸州医学院;2013年

本文编号：2815103