基于MS2噬菌体病毒样颗粒的流感病毒系列核酸检测质控品的研究

发布时间：2021-01-29 03:52

　　流行性感冒是由流行性感冒病毒（Influenza Viruses）引起的急性呼吸道传染病,据统计全球每年有约25万到50万人死于流行性感冒,因此,流行性感冒病毒严重威胁着人类的公共卫生安全。开展流感监测能及时发现、评估流感疫情,是控制流感流行或大流行的重要手段。目前,全国范围内已经建立起以流感监测网络实验室和流感哨点医院为基础的流感监测网络。本研究针对公共卫生安全威胁较大的8种流感病毒（A/H1N1-2009亚型、季节性A/H1N1亚型、A/H3N2亚型、A/H5N1亚型、A/H7N9亚型、A/H9N2亚型、B/Yamagata和B/Victoria谱系流感病毒）,采用MS2噬菌体病毒样颗粒包装平台,将各亚型/谱系流感病毒核酸检测的靶基因（血凝素基因、神经氨酸酶基因、基质蛋白基因、核蛋白基因、非结构蛋白基因）分别包入MS2噬菌体衣壳蛋白内部,制备了37种的病毒样颗粒作为流感病毒核酸检测模拟样本。为探讨流感病毒核酸检测试剂与其它人患病毒间的交叉反应情况,同时制备包裹麻疹病毒、风疹病毒和丙肝病毒核酸检测序列的病毒样颗粒3种,作为流感病毒核酸检测质评样本盘中的阴性样本,以检测流感病毒核酸检测... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章页数】：301 页

【学位级别】：硕士

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前言
1. 材料和方法
    1.1. 实验材料和试剂配制
    1.2. 方法
        1.2.1. 内含流感病毒基因的表达载体的构建
        1.2.2. 重组病毒样颗粒的表达和纯化
        1.2.3. 重组病毒样颗粒的鉴定与定量
        1.2.4. 流感病毒核酸检测质评样本盘的建立
        1.2.5. 流感病毒核酸检测室间质量评价
        1.2.6. 质评结果的统计分析
2. 结果
    2.1. 病毒基因DNA片段的获取与载体的构建
    2.2. 重组病毒样颗粒的表达和纯化
    2.3. 重组病毒样颗粒的鉴定
        2.3.1. 琼脂糖凝胶电泳鉴定重组病毒样颗粒
        2.3.2. SDS-PAGE鉴定重组病毒样颗粒
        2.3.3. 逆转录PCR鉴定重组病毒样颗粒内含的目的RNA序列
        2.3.4. 数字PCR定量病毒颗粒拷贝数
        2.3.5. 样本盘的建立及验证
        2.3.6. 漂流样本检测结果
        2.3.7. 2016年全国流感病毒核酸检测室间质量评价结果
3. 讨论
参考文献
论文综述
    参考文献
附录1 pACYCDuet-1载体详细信息
附录2 重组表达载体测序结果
附录3 室间质量评价情况调查通知
附录4 全国流感病毒核酸检测项目开展情况调查表
附录5 活动安排及注意事项
附录6 流感病毒核酸检测室间质量评价调查活动结果回报表
致谢
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本文编号：3006222