组蛋白乙酰化酶抑制剂通过阻断TGF-β1/Smad3通路逆转腹膜间皮细胞的上皮—间质转分化

发布时间：2021-06-09 04:09

　　目的:腹膜纤维化是腹膜超滤过功能衰退和终止腹膜透析的主要原因,而腹膜纤维化是高糖、腹膜炎等因素导致的,而腹膜间皮细胞（HPMCs）的上皮-间质转分化（EMT）被认为是腹膜纤维化的重要机制。表观遗传学是近年来生物医学研究的热点,组蛋白修饰是表观遗传学中重要的修饰方式。最新研究所示,组蛋白乙酰化修饰被证实与多种组织器官的纤维化过程有关,包括肝脏、肺和肾脏等。目前组蛋白乙酰化修饰是否参与腹膜纤维化过程尚无文献报道。因此,我们试图通过本研究明确组蛋白乙酰化修饰对腹膜纤维化的影响及其可能的作用机制。方法:以腹膜间皮细胞为研究对象,分别采用高糖和组蛋白乙酰化酶抑制剂C646干预,以CCK-8分析试验检测腹膜间皮细胞增殖活性。采用免疫印迹法（Western Blot）检测细胞钙粘蛋白（E-cad）、a-肌动蛋白（a-SMA）、I型胶原蛋白（Col I）,纤维连接蛋白（FN）、乙酰化的组蛋白H3和H4、TGF-β1和磷酸化-Smad的蛋白质表达;采用比色分析试剂盒分析组蛋白乙酰基移转酶（HAT）活力;实时荧光定量试验检测HAT亚型p300和GCN5 m RNA的表达;用CHIP试验和定量实时聚合酶链反... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：50 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 引言
第2章 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
            2.2.1.1 腹膜间皮细胞的复苏
            2.2.1.2 腹膜间皮细胞的培养
        2.2.2 细胞增殖分析实验
        2.2.3 Western blotting（免疫印迹）分析
            2.2.3.1 腹膜间皮细胞细胞总蛋白的提取
            2.2.3.2 BCA法测定蛋白质含量
            2.2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)
            2.2.3.4 Western免疫印迹检测
        2.2.4 组蛋白乙酰基移转酶(HAT)活力分析用试样
        2.2.5 实时定量逆转录聚合酶链反应（QR T
            2.2.5.1 试剂配置与器皿处理
            2.2.5.2 腹膜间皮细胞总RNA的提取
            2.2.5.3 细胞总RNA样品的测定
            2.2.5.4 QR RT-PCR检测
        2.2.6 染色质免疫沉淀反应(CHIP)试验和定量实时聚合酶链反应(QRT-PCR)
    2.3 统计学方法
    2.4 总结性技术路线
第3章 结果
    3.1 高糖诱导腹膜间皮细胞EMT
    3.2 高糖诱导腹膜间皮细胞EMT时，腹膜间皮细胞组蛋白乙酰化H3增加
    3.3 组蛋白乙酰基移转酶抑制剂C646阻断高葡萄糖诱导的腹膜间皮细胞EMT
    3.4 组蛋白乙酰基转移酶阻滞剂C646阻断TGF-β1/Smad3的信号转导通路逆转高糖诱导腹膜间皮细胞EMT
第4章 讨论
第5章 结论
参考文献
综述 腹膜透析相关性腹膜纤维化的研究进展
    参考文献
科研成果
感谢



本文编号：3219896