利用飞行时间质谱对脊髓性肌萎缩症进行分子检测应用研究及WGA结合短片段Gap-PCR对α-地贫SEA突变的胚胎植入前遗传

发布时间：2025-04-18 02:53

　　第一部分利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱对脊髓性肌萎缩症进行分子检测的应用研究背景与目的:脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种具有临床表型异质性的常染色体隐性遗传病。据了解,目前中国每年大约出生1700～2830名SMA患者,SMA病人数量大约为30000～50000人。开展早期诊断、产前诊断及遗传咨询对于降低SMA患儿出生数量、病人病情的判断和治疗、减轻社会经济负担具有重要的意义。96.4%的SMA由于SMN1基因的纯合缺失发生导致,剩下3.6%SMA病人发病原因是一个SMN1基因缺失,另一个出现点突变。与SMN1高度同源的SMN2基因功能大约只有SMN1基因的10%,但是由于合成蛋白累积的效应,SMN2为SMA疾病表型的重要修饰基因。此外已有相关报道,NAIP、GTH2F2、H4F5基因均与SMA疾病相关。目前可用于检测SMA疾病的方法主要包括 PCR-SSCP、PCR-RFLP、Real-time PCR、PCR-DHPLC、AS-PCR、MLPA和Sanger测序、二代测序等,但是由于SMA疾病涉及相关基因结构的复杂性、临床表型的异...

【文章页数】：86 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－３飞行时间质谱技术原理??Ｆｉｇｕｒｅｌ－３?ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ??

芯片基质结合后，经激光激发及在外加电场的作用后，延伸产物分子飞行穿越??真空环境到达检测位置，飞行时间与延伸分子的荷／质比成一定比例关系，??ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ?ＭＳ检测原理如图１－３所示。因此，飞行时间质谱能根据所延伸单个??碱基分子量大小差异对突变位点基因型进行判断，检测分子....

图４－１引物有效性及特异性验证电泳图??？４－ｌ?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｆｏｒ?ｐｒｉｍｅｒｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｎｄ?ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ??

４．１扩增引物的特异性和有效性验证??８对扩增引物单独扩增后，以凝胶琼脂糖电泳分析。通过观察电泳有无杂带??以及目的片段判断所设计引物的特异性以及有效性。电泳结果如图４－１所示。目??的条带分子量大小正确，条带单一，无非特异性的扩增。说明扩增引物能成功??扩增，且特异性好。??ｏ....

图４－２野生型和突变性质粒测序结果图??Ｆｉｇｕｒｅ?４－２?Ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ａｎｄ?ｍｕｔａｎｔｉｏｎａｌ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ，?ＭＵＴ?ｓｈｏｗｓ?ｔ?

４．１扩增引物的特异性和有效性验证??８对扩增引物单独扩增后，以凝胶琼脂糖电泳分析。通过观察电泳有无杂带??以及目的片段判断所设计引物的特异性以及有效性。电泳结果如图４－１所示。目??的条带分子量大小正确，条带单一，无非特异性的扩增。说明扩增引物能成功??扩增，且特异性好。??ｏ....

图１－２?ＴａｑＭａｎ探针法及跨越断裂点ＰＣＲ原理??

??原理见图１－２Ａ），因此可以通过检测两个内参基因荧光信号的有无及对Ｃｔ值计??算，判断ＷＧＡ产物中ｇＤＮＡ是否被成功扩增及扩增含量；最后通过短片段跨??越断裂点ＰＣＲ?（Ｇａｐ－ＰＣＲ）技术实现胚胎快速分型，Ｇａｐ－ＰＣＲ原理是在缺失断??裂点两端设计扩增引物，只有当缺失情况....

本文编号：4040410