基于核酸适配体的侧流层析试纸条法快速检测氯霉素残留

发布时间：2020-04-21 00:03

【摘要】：氯霉素是一种广泛使用的抑菌性光谱抗生素,普遍添加于动物饲料和药物中,近年来氯霉素滥用现象愈加普遍,它对人体的一些副作用也凸显出来,所以氯霉素的追踪与检测变得非常重要,尤其是简单、快速、成本低的实时检测方法具有更加广泛的研究前景,目前也急需开发特异性强、灵敏度高的新型检测方法用于氯霉素残留的初步快速筛查。侧流免疫试纸条(LFAS)是基于色谱的一种生物传感器,近年来,试纸条生物传感器由于其可移动性、快速性,成本低和易于操作而引起了研究者广泛的兴趣。目前也逐渐开发了一系列基于抗体的试纸条传感器用于氯霉素的定性或者定量分析。但因为抗体是在体内合成,非免疫原性和毒性的靶标无法产生相应的抗体,所以抗体并不是普遍适用的。近年来,一种新的识别分子—适配体被广泛用于生物识别。作为一种较短的单链DNA或RNA(通常为DNA),这些高度特异性的分子会与靶标分析物形成特殊的三维构象。在此,基于竞争性测定开发了一种新的敏感和特异性试纸条传感器,使可视化的纳米金颗粒的着色剂来检测氯霉素。通过肉眼肉眼检查红色条带并通过带状读数仪进行扫描以实现精确的定量检测。文章还对金纳米粒子的粒径大小,适配体的数量,链霉亲和素的种类和pH,读取时间和封闭方式、硝化纤维膜的种类等进行了优化。同时进行氯霉素和金标适配体的预孵育过程以进一步提高灵敏度,得出最终的传感器检测限(LOD)为0.5 ppm,读数仪的检测限LOD分别为63.4ppb。此外,开发出的试纸条传感器对于检测氯霉素具有高灵敏度,并且对氯霉素和氯霉素的类似物(氟苯尼考和甲砜霉素)具有高度特异性。最后,文章还对实际样品市政用水进行两氯霉素的检测,测得的加标回收率为85.7%-110.68%,说明样品的基质影响较小,该试纸条的传感器抗干扰能力强,准确性高,可对氯霉素特异性识别。此基于纳米金的适配子传感器检测氯霉素时不需要任何复杂的设备,另外,对于其他小分子微污染物检测,可以进一步参考使用次核酸适配体对用于生物传感器开发的设计。
【图文】：

图１－２试纸条传感器的使用步骤逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－２邋Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎｄ邋ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｐｌａｔｆｏｒｍ邋ｆｏｒ邋ｔｈｅ邋ＬＦＡ邋ｓｙｓｔｅｍｓ逡逑如图１－２所示，试纸条由几个部分组成：样品垫，结合垫，硝化纤维素膜，吸收逡逑垫和支撑垫。逡逑样品垫：它是条带中的第一个垫。其功能是将样品传送到测试条的下一组件。它逡逑由纤维素或玻璃纤维制成，并且将液体样品施加在该垫上以开始测定。样品垫有时被逡逑设计成在运输之前预处理样品。该预处理可以包括样品组分的分离，干扰的除去，ＰＨ逡逑的调节等UO。因此，样品垫在使用前应预处理，，其通常在缓冲液（ｐＨ邋８．０）中浸泡，逡逑缓冲液含有邋０．２５％邋Ｔｒｉｔｏｎ邋Ｘ－１００，邋０．０５Ｍ邋Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ邋和邋０．１５Ｍ邋ＮａＣｌ［２３］。用于检测邋ＡＴＰ邋的逡逑另一基于适体的条生物传感器，其样品垫用ＴＢＳ缓冲液（２０邋ｎｍＭ邋Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ，邋１４０邋ｍＭ逡逑ＮａＣｌ，邋５邋ｍＭ邋ＫＣ１，１邋Ｍｍ邋ＣａＣｈ，邋１邋ｍＭ邋ＭｇＣｈ，邋ｐＨ邋７．２）饱和［２４］。最新研宄表明，样品垫逡逑先用含１邋％0ＶＡ的ＰＢＳ饱和溶液浸泡并在３７邋°Ｃ下干燥后，至于阴凉通风条件下保存逡逑［２５］。逡逑结合垫：它是条带中的第二个垫。结合垫是加载生物识别分子的垫。在移动液体逡逑样品时

Ｆｉｇｕｒｅ邋２－３邋Ｔｈｅ邋ＴＥＭ邋ｐｉｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋１２邋ｍｉｎ邋（Ａ），邋１３邋ｍｉｎ邋（Ｂ），邋１４邋ｍｉｎ邋（Ｃ）邋ａｎｄ邋１５邋ｍｉｎ邋（Ｄ）邋ｒｅａｃｔｉｏｎ邋ｔｉｍｅ邋ｏｆ逡逑ＡｕＮｐｓ逡逑从图２－３可以看出，当反应时间为１２邋ｍｉｎ，１３邋ｍｉｎ，１４邋ｍｉｎ时，电镜图下观察到的纳逡逑米金颗粒大小不一，在视野内的分布不均匀，颗粒形状不成均匀的圆形，甚至有椭圆逡逑形和方形的颗粒，且颗粒之间也有重叠分布；而当反应时间达到１５邋ｍｉｎ时，电镜图下逡逑观察到的纳米金颗粒大小均一，呈饱满的圆形，在视野内的分布均匀，颗粒与颗粒之逡逑间无重叠。因此，可以判定当反应时间为１５邋ｍｉｎ时，制备得到的纳米金溶液质量较好。逡逑根据以上紫外光谱图与ＴＥＭ电镜图，分析可知，当反应时间小于１５邋ｍｉｎ时，柠檬逡逑酸三钠不足以将溶液中的金离子完全还原出来，即该还原反应没有彻底结束，溶液中逡逑的纳米金颗粒较少，因此使得吸光度不高，且纳米金颗粒分布不均匀。所以可判定１５逡逑ｍｉｎ为加入朽１檬酸三钠之后的最佳反应时间。逡逑将反应转速保持３００邋ｒ／ｍｉｎ不变和转速为３５０邋ｒ／ｍｉｎ
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：TQ450.263;TP212.3

【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 高林;;氯霉素的不良反应及其残留检测方法研究进展[J];动物医学进展;2010年04期

2 吴晓丰,杨鹭花;氯霉素残留的危害及其检测方法[J];动物医学进展;2004年03期

本文编号：2635118