防止野生大豆种质资源流失的检验检疫技术研究

发布时间：2020-05-29 11:03

【摘要】：根据《质检总局关于加强出入境生物物种资源检验检疫工作的指导意见》(国质检动[2013]1号),国家质检总局将出入境生物物种资源检验检疫作为重点工作,野生大豆(Glycine soja)作为我国珍稀种质资源,大量随出口大豆类产品外流,而在检验检疫工作中,由于栽培大豆(Glycine max)与野生大豆之间亲缘关系很近,用传统的形态学鉴定野生大豆种质困难,本项目以辽宁出入境检验检疫出口大豆类货物取得样品为主要研究材料,分别采用普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术、DNA条形码技术及环介导等温扩增(LAMP)技术对野生大豆种质的快速鉴定方法进行研究。(1)普通PCR方法:基于UNK2基因的cDNA序列,设计普通PCR引物对样品基因组DNA进行扩增,构建PCR反应体系,该方法可以区分大豆和非大豆类其它豆类种质,但是否能区分大豆种质和非豆类种质还有待进一步研究。(2)实时荧光定量PCR方法:以UNK2基因为靶基因,设计特异性的引物探针,构建实时荧光定量PCR反应体系,该方法可以特异性地区分大豆种质和其它豆类种质,但是否能区分大豆种质和非豆类种质还有待进一步研究。(3)DNA条形码技术:以ITS2、trnH-psbA、matK、rbcL为条码基因,经过PCR扩增测序、序列比对分析表明,matK的变异率最大,但其PCR扩增效率及测序成功率较低;ITS2及trnH-psbA多态性不佳。遗传距离分析结果显示,matK基因序列在大豆属物种间差异比较大,遗传距离远远大于其他3种基因种间遗传距离平均值,ITS2、psbA、rbcL依次递减。系统进化分析结果显示,大豆属物种间利用上述4种基因不能够有效区分,但从扩增的难易程度、片段的大小来看,rbcL是个有潜力的候选片段,可以尝试和其他片段组合起来使用。(4)环介导等温扩增(LAMP)技术:以matK、ITS2基因为靶基因,针对野生大豆453设计特异性的3组引物组合,经LAMP试验检测结果表明:引物组1的LAMP反应扩增最早,可作为野生大豆453的最优LAMP引物,并以引物组1建立最佳LAMP检测体系。
【图文】：

基因组DNA,基因,红小豆,野生大豆

15 1 18个豆类种子基因组 DNAUNK2 基因普通 PCR扩增结果Fig 1 18 results of pcr amplification in UNK2Y1-Y5：野生大豆；M9：越南大豆；V1:绿豆；V2：红小豆；V2000培种和 5 个野生大豆的基因组 DNA 均仅有一个扩4 个其它的豆类种子：绿豆（V1）；红小豆（4）没有扩增产物。结果初步表明该普通 PCR 方种质。

cDNA序列比较,基因,测序,产物

16图 2 基因 UNK2 普通 PCR产物测序结果及与 cDNA序列比较结果uencing results of ordinary PCR products in UNK2 and comparison results with cDN：unk2mRNA为基因 UNK2 的 cDNA序列，unk2DNA为基因 UNK2 的 DNA序，该两内含子的长度分别为 119 bp 和 194 bp。大内含子结束，含有典型的真核生物 GT-AG-内含子结构，是最常见以 AT 起始，以 TG 结尾，含真核生物 AU-AG 类次要内列在相关大型基因数据库进行比对，未发现相同序列，且，表明该基因组序列是新序列。此为首次以该基因新序列法。
【学位授予单位】：山东农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S565.1;S41

【参考文献】