白术、铁皮石斛和杭白菊6种病害的病原鉴定与防治初探

发布时间：2020-07-16 00:12

【摘要】：中药材是浙江省的十大农业主导产业之一,基本形成了白术、杭白菊等“浙八味”道地药材和铁皮石斛等名贵药材的优势产区,是农民增收的重要经济来源。但病害基础性研究薄弱,登记农药产品少及质量安全体系滞后,导致了农药残留和食品安全问题成为制约行业发展的关键因子之一,因此弄清楚病害发生、危害和规律,对中药材的生产变得尤为重要。本研究从浙江省白术、杭白菊和铁皮石斛主产区采集病害样品,通过病原菌分离、致病性试验,综合形态学和分子系统发育分析对病原菌进行了分离、鉴定,并初步研究了其防治。明确了白术立枯病病原为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani),对噻呋酰胺和咯菌腈的敏感性最高,EC_(50)值均为0.06μg·mL~(-1);白绢病病原为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii),对吡唑醚菌酯敏感性最高,EC_(50)值为0.02μg·mL~(-1)。白术叶斑病病原为Phoma exigua,对叶斑病菌生物学特性测定表明:该菌菌丝生长的最适温度为28℃,最适pH为8;不同碳源与氮源对其菌丝生长的影响差异显著,其中可溶性淀粉和蛋白胨分别为最适碳源与氮源;当温度为24℃、相对湿度为100%时,最适于分生孢子萌发;菌丝和分生孢子的致死温度分别为47℃和54℃;药剂敏感性测定结果表明:孢子对吡唑醚菌酯的敏感性最高,EC_(50)值为0.10μg·mL~(-1);在离体条件下,对活性较强的杀菌剂进行了防效筛选,结果表明:吡唑醚菌酯8.5μg·mL~(-1)浓度药液对叶斑病的离体叶片保护效果达到100%。铁皮石斛黑斑病菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima),对咯菌腈的菌丝敏感性最高,EC_(50)值为0.10μg·mL~(-1);杀菌剂防效筛选结果表明:苯醚甲环唑2.8μg·mL~(-1)浓度药液对黑斑病的离体叶片保护效果为49.28%。铁皮石斛炭疽病病原为茶树炭疽(Colletotrichum fructicola),对咪鲜胺的菌丝敏感性最高,EC_(50)值为0.02μg·mL~(-1);杀菌剂防效筛选结果表明:苯醚甲环唑4.8μg·mL~(-1)浓度药液对炭疽病的离体叶片保护效果为42.00%。杭白菊叶枯病病菌为Phoma bellidis,为研究田间叶枯病菌对多菌灵的抗性程度,采用区分剂量法检测了34株杭白菊叶枯病菌对多菌灵的抗药性,并对不同表现型病菌的β-tubulin基因进行分析比较。结果显示:杭白菊叶枯病菌对多菌灵的抗性频率高达93.94%,且均为高水平抗性,分子机制为β-tubulin基因第198位发生突变(E198A)。同时,采用菌丝生长速率法,测定了叶枯病菌对吡唑醚菌酯的敏感性,结果表明:叶枯病菌群体对吡唑醚菌酯的敏感性差异较大,其中33株菌株EC_(50)值在0.060~0.370μg·mL~(-1)之间,呈连续正态分布,平均EC_(50)值为0.177μg·mL~(-1),即为桐乡杭白菊叶枯病菌群体对吡唑醚菌酯的敏感基线。
【学位授予单位】：浙江农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S435.672
【图文】：

立枯病,叶斑病,白术,病害

经 2015~2016 年调查发现，浙江省磐安县白术种植区立枯病和白绢病发生较轻，立枯病发病初期茎基部出现水渍状暗褐色病斑，病斑环茎蔓延。随后植株整体表现萎蔫，顶部叶片下垂干枯，近地面叶片出现大面积黑褐色病斑，茎基部溢缩，表皮都为黑褐色病斑（图 2.1 a b）。白绢病发病初期在茎基部伤口开始发病，随着病情发展，茎基部出现水渍状、暗褐色、不规则病斑，近地面叶片黄化萎蔫。病情后期茎基部和近地面叶片被白色呈绢丝状菌丝缠绕，植株可从基质中轻易拔起，叶片、茎部和土层中可见大量油菜籽状茶褐色菌核（图 2.1 c d）。叶斑病发生较为严重，病株率可达 70~80%，病重植株全株焦枯死亡。病害一般在 4 月下旬至 5 月初始发生，6~8 月份温湿度适合时发病严重，未清理病残体的连作田块发病更为严重，9 月进入病情末期，但仍有发生。叶斑病菌首先侵染茎基部老叶，后向上扩展，病情严重时扩展至整株，导致全叶焦枯（图 2.1 e f）。发病初期叶片上产生大小不等的褐色斑点，病斑形状受叶脉限制，后期病斑不断扩大，中央为灰白色，出现大量黑色小点，即分生孢子器，分生孢子可通过雨水、风力等方式进行传播至附近植株引起发病。

致病症状,茎杆,分离物,白术

2.2.2 分离物致病性分别将立枯病的病样分离物 PARS16-1 和 PARS16-2，白绢病的病样分离物PASR16-1 和 PASR16-2，叶斑病的病样分离物 PAPE16-1 和 PAPE16-2 进行致病性试验。结果表明了三种病害分离物对白术具有致病性，且致病症状与田间症状相似，且对照处理均未发病。此外分离物 PASR16-1 和 PASR16-2 对白术茎杆同样具有致病性（图 2.2）。对接种发病后的 3 种病斑进行再分离，获得与原菌株形态一致的病原菌，根据柯赫氏法则，明确菌株PARS16-1和PARS16-2，PASR16-1和PASR16-2，PAPE16-1和 PAPE16-2 分别为白术立枯病、白绢病和叶斑病的病原菌。

菌落形态,PDA培养基,菌落形态,病原菌

9 d 后菌核颜色变为茶褐色，表面光滑，不与菌丝相连，呈近球形或椭球形（图2.3 d-f），大小为（1.45～1.76）mm×（1.29～1.61）mm。

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