杀线虫真菌的筛选鉴定及胶霉毒素的初步分离

发布时间：2020-07-17 09:47

【摘要】：根结线虫(Root knot nematode,RKN)是危害最严重的植物寄生线虫,其分布广、寄主多,是威胁农业生产的重要病原物。目前,化学杀线剂长期施用,导致作物产生抗药性、抗性品种抗性丧失以及国家双减项目的出台,使越来越多的研究者把目光转向生物防治。本研究以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)J2为靶标,对沈阳农业大学北方线虫研究所提供的890株真菌菌株发酵液进行筛选,同时对高效菌株进行鉴定,并进行盆栽和温室田间试验验证;最后,对其代谢产物杀线虫活性物质进行初步探究,主要研究结果如下:1.真菌菌株发酵液杀线虫活性试验:经复筛后共筛出8株对南方根结线虫J2校正死亡率在85%以上的菌株。这8株真菌发酵液不仅对南方根结线虫J2有强毒杀作用,对南方根结线虫卵孵化也具强抑制作用。2.高效菌株的鉴定:以形态学鉴定为基础,充分结合rDNA-ITS分子生物学技术手段,对8株高效生防真菌进行鉴定。结果表明:1株真菌属于曲霉菌,经鉴定菌株Snef354为黑曲霉(Aspergillus niger)。4株真菌属于木霉菌,经鉴定菌株Snef622为深绿木霉(Trichoderma atroviridis),菌株Snef1883为哈茨木霉(T.harzianum),菌株Snef1910为桔绿木霉(T.citrinovirid),菌株Snef2382为拟康宁木霉(T.koningiopsis)。3株真菌属于青霉菌,经鉴定菌株Snef1851为普通青霉(Penicillium commune),菌株Snef2367为产黄青霉(P.chrysogenum),Snef2281为壳青霉(P.crustosum)。3.选取筛选鉴定后的高效菌株桔绿木霉Snef1910和产黄青霉Snef2367进行真菌发酵液促生防病盆栽和温室田间试验:结果表明,桔绿木霉Snef1910和产黄青霉Snef2367发酵液均可显著降低根结指数和土壤中J2数量,并且显著增加株高、根长、根鲜重和根干重,具有明显的促生效果,但由于田间根结线虫发生严重,使番茄植株根鲜重和根干重显著低于对照处理。此外,桔绿木霉Snef1910和产黄青霉Snef2367盆栽试验中对番茄根结线虫的减退率分别高达61.02%和56.67%,温室田间试验30 d的防效分别高达71.43%和64.29%。本研究表明桔绿木霉Snef1910和产黄青霉Snef2367菌株发酵液具有很好的促生和防病效果,为植物线虫病的生物防治提供了新的生防资源。4.桔绿木霉Snef1910真菌代谢产物活性物质初步研究:桔绿木霉Snef1910杀线虫活性物质不在菌株菌丝体中,而存在于菌株的发酵液里。胶霉毒素毒杀线虫活性好,且效果稳定。对菌株的代谢产物进行预处理,经高效液相分析得:桔绿木霉Snef1910代谢产物中没有胶霉毒素化合物,或胶霉毒素化合物含量较少,不足以在色谱图中体现。
【学位授予单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S476.1
【图文】：

显微照片,菌落形态,黑曲霉,显微照片

图 3-1 黑曲霉（Aspergillus niger）Snef354 菌落形态（C-E）和显微照片（A 和 B）Figure 3-1 Colonial morphology (C-E) and microscopic photograph (A and B) of Aspergillus niger3.3.1.2 菌株 Snef622 鉴定结果高效菌株 Snef622 在 PDA 培养基上生长迅速，72 h 几乎长满 90 mm 的培养皿，菌落边缘均匀，初为白色，之后逐渐被绿色的产孢区所覆盖，菌落背面无色；同心环纹，且中央有一致密的圆盘状结构，分生孢子在此区域大量产生；产生椰子气味和甜味（图3-2C-E）。分生孢子绿色，亚球形至卵圆形，没有明显的脱落痕迹，且分生孢子壁表面光滑。分生孢子梗常见分枝方式为对生，但其典型分枝方式为单侧分枝，且分枝角度近似于 90°。瓶梗呈直或弯曲状，有时也呈钩状；常为 2~4 个轮状排列，单生；漩涡状排列中的最顶端瓶梗以及单生瓶梗常为圆柱形，只在尖端下部溢缩，形成颈样形状；尖端下部着生的瓶梗为烧瓶形；没有间生瓶梗（图 3-2A，B）。菌株 Snef622 形态特征与韩树英等（2013）鉴定的深绿木霉（Trichderma atroviridis）完全一致。初步鉴定菌株 Snef622为深绿木霉。

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菌落背面无色；同心环纹，且中央有一致密的圆盘状结构，分生孢子在此区域大量产生；产生椰子气味和甜味（图3-2C-E）。分生孢子绿色，亚球形至卵圆形，没有明显的脱落痕迹，且分生孢子壁表面光滑。分生孢子梗常见分枝方式为对生，但其典型分枝方式为单侧分枝，且分枝角度近似于 90°。瓶梗呈直或弯曲状，有时也呈钩状；常为 2~4 个轮状排列，单生；漩涡状排列中的最顶端瓶梗以及单生瓶梗常为圆柱形，只在尖端下部溢缩，形成颈样形状；尖端下部着生的瓶梗为烧瓶形；没有间生瓶梗（图 3-2A，B）。菌株 Snef622 形态特征与韩树英等（2013）鉴定的深绿木霉（Trichderma atroviridis）完全一致。初步鉴定菌株 Snef622为深绿木霉。

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第三章杀线虫生防真菌的鉴定形或者坛形，基部溢缩显著，中部明显膨大，且逐渐向顶端变细，直或弯曲（图 3-4A，B）。菌株 Snef1883 形态特征与章初龙和徐同（2003）鉴定的哈茨木霉（T. harzianum）完全一致。初步鉴定菌株 Snef1883 为半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，哈茨木霉。

【参考文献】