BmNPV芽生病毒囊膜蛋白组成分析

发布时间：2020-07-22 20:52

【摘要】：家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)是一种严重危害养蚕业的病毒病原体,其基因组与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)基因组相似性很高,但是只能感染家蚕。目前的研究针对AcMNPV入侵和出芽释放方面已经取得较大进展,但是BmNPV BV粒子进入宿主以及其出芽方式的机制的研究较少。研究表明,病毒入侵宿主细胞和出芽释放过程是相对可逆的过程,囊膜病毒的入侵与病毒表面的囊膜蛋白紧密相关,GP64是组I杆状病毒的膜融合蛋白,定位于细胞膜上,病毒粒子在细胞膜处出芽获得囊膜结构以及分布于其上的病毒编码的GP64等蛋白,GP64在病毒入侵过程中介导芽生病毒进入细胞初始感染。我们前期发现GP64定位在细胞膜上或细胞质内部都能产生有感染性的BV,其机理尚不清楚。本文主要对两种不同GP64蛋白BV囊膜组分进行研究,探索BV形成机制,为杆状病毒出芽机制提供基础,主要研究结果如下:首先主要对本实验室前期构建与获得的vGP64与vSPⅡGP64 BV囊膜蛋白进行分离与质谱鉴定。其中两种病毒中共同检测到病毒蛋白30种,其中具有显著性差异的有6种,共同检测到的宿主蛋白有75种;在vGP64病毒中单独检测到4种病毒特异性蛋白,11种宿主特异性蛋白;在vSPⅡGP64病毒中单独检测到1种病毒特异性蛋白,5种宿主特异性蛋白质,然后对对质谱鉴定的差异病毒蛋白进行western-blot验证分析。其次,构建eGFP不同定位的细胞系,通过两种病毒感染形成的BV囊膜中eGFP的分布初步推测BV囊膜来源于内膜系统。两种病毒BV基因组绝对定量分析。研究发现,相同质量的DNA产生的病毒滴度不同,突变体滴度低,说明部分BV可能没有感染性。最后,通过两种病毒感染的细胞的电镜切片分析,初步确定BmNPV感染BmN细胞后存在两种出芽方式。通过上述研究,我们初步揭示了两种病毒囊膜蛋白组成的差异,并且初步验证了两种病毒出芽方式存在差异,为进一步研究BmNPV出芽方式提供参考。
【学位授予单位】：江苏科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S884.51
【图文】：

鳞翅目昆虫,柱状细胞,血淋巴,边框

图 1.1 感染鳞翅目昆虫的初始感染过程图ure 1.1 Initial infection process of infected lepidopteran in（摘自 Federici et al., 1997）B，microvillar 刷边框；CC，柱状细胞； RC，再生细TM，气管基质； CMC，圆形肌肉； H，血淋巴ic membrane; BB, micro-fleece brush border; CC, ColuBL, basal layer; TM, tracheal matrix; CMC, round muscle

再生细胞,鳞翅目昆虫,柱状细胞,血淋巴

图 1.1 感染鳞翅目昆虫的初始感染过程图Figure 1.1 Initial infection process of infected lepidopteran insec（摘自 Federici et al., 1997）膜； BB，microvillar 刷边框；CC，柱状细胞； RC，再生细胞；TM，气管基质； CMC，圆形肌肉； H，血淋巴 peritrophic membrane; BB, micro-fleece brush border; CC, Columnave cells; BL, basal layer; TM, tracheal matrix; CMC, round muscle; H,

跨膜蛋白,磷脂酰丝氨酸,病毒粒子,掺入

芽的驱动力有多种，大多数病毒的出芽是依赖于宿主细胞些病毒出芽不依赖于 ESCRT，而依赖于病毒糖蛋白[26]。在它们编码的糖蛋白插入到细胞中相应的膜结构上。研究病毒、流感病毒糖蛋白，而无其它病毒成分表达就能够产生；HIV-1 病毒豆蔻酰化的 Gag 蛋白与磷脂双分子层病毒出芽[27]；甲型流感病毒则依赖于跨膜蛋白 M2 来完成的膜融合蛋白在病毒出芽过程中发挥关键作用。蛋白对病毒出芽也有很重要的作用。在对埃博拉病毒出a2+依赖型的跨膜蛋白 16F 可以使磷酯酰丝氨酸在细胞膜毒粒子膜上完成出芽过程[19]。如图 1.3 所示，首先内质网达，激活 ER 应激反应；使得细胞内钙（Ca2 +）浓度增加后 TMEM16F 介导 PtdSer 从质膜的内叶到外叶的易位；质膜的脂筏区域内出芽，而对 16F 蛋白进行敲低后发现

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