枯草芽孢杆菌BS05防治小麦纹枯病的研究

发布时间：2020-07-26 13:32

【摘要】：小麦纹枯病(wheat sharp eyespot)是由禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)和立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)引起的一种土传性真菌病害。该病会严重影响小麦的品质和产量。目前我国主栽小麦品种还没有对小麦纹枯病完全免疫的品种,在生产上主要利用化学药剂防治小麦纹枯病,而化学药剂污染环境,还会对小麦产量产生一定的影响。因此,利用对环境无害的生防菌防治小麦纹枯病有重要意义。本研究中利用前期分离获得的对小麦纹枯病菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌BS05,利用利福平和链霉素标记法研究了其在小麦上的定殖规律,通过室内盆栽实验研究了对小麦的防病促生效果以及防病的机制,利用单因素实验和正交实验设计相结合的方法优化了发酵培养基成分和培养条件。得到以下结论:(1)利用抗生素诱导原始菌株BS05获得一株能在含300μg/mL链霉素和100μg/mL利福平的NA培养基中稳定生长的抗生素标记菌株BS05~(sr),抗生素标记菌株BS05~(sr)表现出良好的耐药稳定性。与原始菌株比较,其细菌群体生长曲线,生物膜形成能力,对病原菌的拮抗作用均与原始菌株无显著性差异。(2)通过灌根和浸种方式接种枯草芽孢杆菌BS05,菌株BS05可以在小麦上定殖。在两种处理中,菌株BS05在小麦中的定殖量变化趋势为先逐渐增加,达到顶峰后逐渐减少,在第30天时仍能够检测到菌株BS05存在。其中,灌根处理中,在第7天的定殖量最大,在小麦根、茎、叶中的定殖量分别为1.20×10~5CFU/g、1.02×10~4CFU/g、5.91×10~3 CFU/g。浸种处理中,在第10天的定殖量最大,在小麦根、茎、叶的定殖量分别为8.95×10~4 CFU/g、2.98×10~4 CFU/g、3.87×10~3 CFU/g。(3)菌株BS05能够诱导小麦幼苗中多酚氧化酶(PPO),过氧化物酶(POD),苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性增加。在实验中,菌株BS05菌悬液处理对小麦幼苗中PPO,POD,PAL三种酶活性分别增加21.60%,19.92%,28.87%。菌株BS05除菌发酵液处理对小麦幼苗中PPO,POD,PAL三种酶活性分别增加20.61%,18.43%,24.47%。(4)菌株BS05对小麦的生长有促进作用,菌株BS05浸种处理后小麦株高比对照增加5.49%,鲜重增加27.52%,干重增加28.95%。盆栽实验表明,菌株BS05对小麦纹枯病有一定的防治效果,对小麦纹枯病的防治效果达到62.77%。(5)菌株BS05的最优发酵培养基组分为蔗糖1.5%、牛肉膏1.0%和KH_2PO_40.10%,最优培养条件为培养基初始pH7,培养温度30℃,转速150r/min,接种量3%。在最优发酵培养基组分和最优培养条件下,可以增加抑菌活性物质的活性。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S435.121.4;S476.1
【图文】：

菌落形态,原始菌株,抑菌效果,链霉素

素标记菌株 BS05的获得素逐步诱导，最终获得一株抗 300μg/mL 链霉素和。所获得的突变菌株 BS05sr在含 300μg/mL 链霉素和A 固体培养基上能正常生长，而原始菌株不能生长。固体培养基上的菌落形态完全一致。素标记菌株 BS05sr耐药稳定性检测在无抗生素选择压力下传代和低温（4℃）保存两种能够在含 300μg/mL 链霉素和 100μg/mL 利福平的表明菌株 BS05sr具有良好的耐药稳定性。素标记菌株 BS05sr对小麦纹枯病菌的拮抗作用表明（见图 3.1），枯草芽孢杆菌 BS05 的抑菌带宽度 BS05sr抑菌带宽度均值为 6.9mm，无显著性差异。株 BS05sr的抗病性质没有发生改变。

生长曲线,原始菌株,抗生素,生长曲线

菌株群体生长状态比较不同时间点测定菌液 OD600，实验结果表明（图 3.2），两菌株的吻合，不存在明显差异，表现出相同的延迟期，指数期和稳定期果表明抗生素标记不影响菌株 BS05 的生长。

生物膜,形成情况,原始菌株,抗生素

素标记菌株的生物膜形成能力和定量测定相结合的方法测定了原始物膜形成能力，结果表明两者没有明下主要以生物膜的形式存在，微生物，提高对不良环境胁迫的抗性，上述异，表明抗生素标记菌株 BS05sr可能

【参考文献】