扩展青霉H1侵染柑橘机制的初步研究

发布时间：2020-08-03 11:40

【摘要】：近几年的研究发现由扩展青霉(Penicillium expansum)引起的柑橘病害日益严重,且P.expansum在侵染宿主过程中会产生展青霉素(Patulin,PAT)以及桔霉素(Citrinin,CIT)等严重危害人类健康的真菌毒素。目前对于柑橘采后病原菌侵染机制的研究主要以指状青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(Penicillium italicum)为主,而对P.expansum侵染柑橘的条件、致病机制等方面的研究还未见相关文献报道。为此,本论文从P.expansum和柑橘的互作角度出发,探讨P.expansum侵染柑橘的致病机制,旨在为柑橘采后病害的防治提供必要的理论依据。论文的主要研究成果如下:(1)从腐烂柑橘伤口处筛选到一株致病菌H1,经ITS区、BenA、CaM、PRB2序列分析和形态学鉴定,确定为扩展青霉(P.expansum)。利用高效液相色谱检测发现其能够产生CIT。(2)研究了不同温度、保湿时间和菌龄对P.expansum H1侵染柑橘的影响,结果表明,P.expansum H1在25°C时潜育期最短,侵染能力最强,4°C时P.expansum H1侵染能力受到抑制;保湿时间越长,越有利于P.expansum H1侵染柑橘;菌龄也会影响P.expansum H1侵染柑橘,不同菌龄的P.expansum H1侵染能力高低排序为:培养7 d培养11d培养3 d培养15 d培养19 d。(3)从细胞壁降解酶和毒素CIT两个方面出发,研究P.expansum H1侵染柑橘的致病机理。结果表明,P.expansum H1在改良的Marcus培养基和柑橘体内均可产生多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(pectin methylgalacturonase,PMG)、内切β-1,4-葡聚糖酶(endo-1,4-β-D-glucanase,Cx)和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,β-G),酶活性的高低排序皆为PGPMGCxβ-G;将CIT接种到柑橘上会引起伤口处软塌腐烂,同时接种CIT和P.expansum H1的柑橘腐烂程度高于只接种P.expansum H1。此外,研究了不同培养基、温度、pH、溶氧量和培养时间对P.expansum H1生长和产CIT能力的影响,发现在25°C,pH为3的YSM培养基上摇床培养2周时,P.expansum H1产生的CIT含量最高。(4)利用转录组技术,比较分析了P.expansum H1侵染柑橘后基因的表达情况,结果显示,共鉴定出差异表达基因230个,其中上调基因178个占77.4%,下调基因52个占22.6%。从中挑选出9个上调基因进行RT-qPCR验证,其中,有4个基因与细胞壁降解酶相关、1个基因与CIT的产生相关、1个基因与宿主pH的改变相关、2个基因与抗氧化应激反应相关、1个基因与效应因子相关。验证结果与转录组结果一致。
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S436.66
【图文】：

2.1 培养 3 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形态（A-正面；B-反colony morphology of strain H1 cultured for 3 d on PDA plate (A-the oreverse side) 2.2 培养 7 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形态（A:正面；B:反lony morphology of strain H1 cultured 7 d on PDA plate (A-the obverseA B

2.2 培养 7 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形态（A:正面；B:反ny morphology of strain H1 cultured 7 d on PDA plate (A-the obverse 图 2.3 菌株 H1 在柑橘上的生长状态及显微状态 growth morphology of the strain H1 on citrus and micro-morphology 的分子生物学鉴定A B

2.1 培养 3 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形态（A-正面；B-反olony morphology of strain H1 cultured for 3 d on PDA plate (A-the obreverse side) 2.2 培养 7 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形态（A:正面；B:反ny morphology of strain H1 cultured 7 d on PDA plate (A-the obverse sA BA B

【参考文献】

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本文编号：2779574