杀线虫活性生防细菌筛选鉴定及脂肽的初步分离

发布时间：2020-10-10 07:24

　　 根结线虫病是严重威胁世界蔬菜产业的重要土传病害之一,造成巨大的产量损失。本研究筛选出2株对蔬菜根结线虫病具有良好生防潜力的生防细菌,并对这2株生防细菌进行了鉴定、发酵条件的优化、活性物质的提取以及分离纯化等方面进行了系统性的研究。其结果如下:1.通过室内触杀试验获得2株高效菌株Sneb709与Sneb811,其发酵液对南方根结线虫二龄幼虫(J2)及其卵的孵化具有显著的活性作用。Sneb709与Sneb811发酵液毒杀南方根结线虫J2的校正死亡率分别为91.10%(24 h)、98.09%(48 h)与93.15%(24h)、98.17%(48 h);抑制根结线虫卵孵化的相对抑制率分别为75.00%(24 h)、62.5%(48 h)与100%(24 h)、75.00%(48 h)。后将其发酵液应用到室内盆栽及温室田间试验中检测其防病效果,试验结果表明二者的发酵液不但对南方根结线虫病具有较好的防治效果,还能促进番茄植株生长以及提高果实数量与重量。2.通过单菌落培养、革兰氏染色、透射电镜观察、生理生化反应以及16S rDNA生物学鉴定对高效细菌Sneb709与Sneb811进行鉴定,结果表明,Sneb709为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);Sneb811为莓实假单胞菌(Pseudomonas fragi)。3.试验初步确定适合解淀粉芽胞杆菌Sneb709的发酵条件为:初始pH值为中性,装液量为每250 m L锥形瓶内装载150 mL发酵液,转速为180 r/min,发酵时间为24 h,发酵培养基组分为1%的葡萄糖、0.5%的酵母膏、0.3%的NaCl和0.2%的MgSO_4;莓实假单胞菌Sneb811的发酵条件为:初始pH值为中性,装液量为每250 mL锥形瓶内装载150 mL发酵液,转速为160 r/min,发酵时间为48 h,发酵培养基组分为1%的蔗糖,0.5%的蛋白胨,0.3%的NaCl和0.2%的MgSO_4。4.通过对发酵液的离心、抽滤、甲醇萃取、旋转蒸发和高效液相色谱(HPLC)等方法系统性地探究了解淀粉芽胞杆菌Sneb709对南方根结线虫具有毒杀效果的活性物质,初步确定所分离的活性物质为脂肽类代谢产物。然而脂肽类抗生素并未有理想中的致死效果,其对南方根结线虫J2的校正死亡率仅有34.83%。因此,推断在Sneb709的活性物质脂肽类代谢产物或许不是其毒杀南方根结线虫的主要活性物质。
【学位单位】：沈阳农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S476
【部分图文】：

复 3 次并随机分布。根结线虫的分级标准为：0 级：没有根结；1 级：根结占整个根系的 1%-15%；2 级根结占整个根系的 16%-25%；3 级：根结占整个根系的 26%-50%；4 级：根结占整个根系的 51%-75%；5 级：根结占整个根系的 76%以上（Barker K R et al.，1985）。防治效果(%)=对照组根结指数-处理组根结指数×100对照组根结指数2.3 结果与分析2.3.1 生防细菌发酵液对南方根结线虫校正死亡率及相对抑制率的测定通过室内触杀试验对 1458 份细菌发酵液中筛选出以下十株效果显著的高效细菌发酵液，其对南方根结线虫 J2 毒杀的校正死亡率均达到 60%以上（图 2-1），并且对南方根结线虫卵孵化具有一定的抑制作用（图 2-2）。其中 Sneb709 与 Sneb811 无论是对南方根结线虫 J2 的毒杀作用，还是对南方根结线虫卵孵化的抑制作用，都显示出相对最高的活性。

2.3.2 高效细菌发酵液对南方根结线虫校正死亡率及相对抑制率的测定继续采用室内触杀试验对 2.3.1 初筛所得 10 株细菌菌株进行复筛，结果表明，Senb709 与 Sneb811 细菌发酵液的综合效果更为显著。其发酵上清液对南方根结线虫 J2有很强的致死效果，并且其致死效果随着处理时间的增加而增强。处理 24 h 时，Senb709及 Sneb811 对 J2 的校正死亡率分别为 91.10%与 93.15%；48 h 时，对 J2 的校正死亡率分别为 98.09%与 98.17% （图 2-3）。此外，南方根结线虫的卵经 Sneb709 与 Sneb811发酵上清液处理后，其孵化率也显著降低。处理 24 h 时，对卵孵化的相对抑制率分别为87.50%与 100%；48 h 时，对卵孵化的相对抑制率分别为 62.50% 与 75.00%（图 2-4）。图 2-2 细菌发酵液对南方根结线虫卵孵化的抑制效果Figure 2-2 The inhibitory effect of the bacterial fermentation broth against M. incognita eggs hatch

图 2-3 高效细菌发酵液对南方根结线虫 J2 的毒杀效果he poisoning effect of the efficient bacterial fermentation brM. incognita J2 hatch 2-4 高效细菌发酵液对南方根结线虫卵孵化的抑制效果he inhibitory effect of the efficient bacterial fermentation b

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本文编号：2834909