滴灌条件下枯草芽胞杆菌NCD-2在棉花土壤中的动态

发布时间：2020-10-30 20:50

　　 棉花黄萎病是由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae Kleb)引起的危害比较严重的土传病害。目前,以生物防治为主的综合防治措施越来越受到人们的关注,在棉花黄萎病的防治中有着极其重要的意义。棉花黄萎病的生物防治措施中尤以微生物杀菌剂防治为重要途径。枯草芽胞杆菌NCD-2菌株是一株从棉花根际土壤中分离得到的拮抗菌株,对棉花黄萎病表现出比较理想的防治效果。以该菌株为有效成分的微生物农药已通过国家农药正式登记(PD20101654)。本试验采用室内模拟方法,探讨滴灌条件下枯草芽胞杆菌NCD-2菌株在土壤、棉花根际和根表土壤中的种群动态,以及对棉花黄萎病的防治效果。取得了以下研究结果:(1)利用枯草芽胞杆菌NCD-2菌株为材料,通过浓度梯度诱导筛选出一株能在含300μg/mL利福平培养基上正常生长的标记菌株NCD-2~(Rif),该菌株的菌落形态和生长曲线与野生菌株无显著差异。(2)采用抗性平板菌落计数法,检测抗性菌株NCD-2~(Rif)在不同深层土壤中的数量变化情况。结果表明,标记菌株NCD-2~(Rif)通过滴灌方式滴到土壤后,其菌量随着滴灌时间和土壤深度的不同而不同。在滴灌后第21 d,5 cm和10 cm处菌体数量达到峰值,之后菌体数量急剧下降;5 cm土层中菌体数量在滴灌35 d后趋于稳定;10 cm土层中菌体数量在滴灌28 d后趋于稳定。在滴灌第14 d后,15 cm和20 cm处菌量达到峰值,之后菌体数量急剧下降;15 cm土层中菌体数量在滴灌21 d后趋于稳定;20 cm土层中菌体数量在滴灌35 d后趋于稳定。在滴灌后的第1 d,25 cm和30 cm处的菌体数量即达到峰值,之后菌体数量急剧下降;25 cm土层中菌体数量在滴灌35d后趋于稳定;30 cm处菌体数量在滴灌28 d后趋于稳定。随着土壤深度加深,土壤中标记菌株NCD-2~(Rif)的菌体数量呈下降趋势;随着取样时间的延长,各层土壤中标记菌株NCD-2~(Rif)的菌体数量也呈下降趋势。(3)通过抗生素抗性标记法结合盆栽试验,以滴灌的方式接种标记菌株NCD-2~(Rif),并于接种后的不同时间检测该标记菌株NCD-2~(Rif)在棉花根际土和根表中的定殖数量。结果表明,标记菌株NCD-2~(Rif)在棉花根际土与根表中均能够定殖,接种后第1 d该菌株在根际土和根表中的菌体数量达到峰值;接种35 d后,标记菌株NCD-2~(Rif)在根际土和根表中的定殖量仍然能达到较高水平,同时发现该标记菌株NCD-2~(Rif)在棉花根际土的菌体数量高于在根表中的数量;随着时间的延长,棉花根际土壤中标记菌株NCD-2~(Rif)的菌体数量急剧下降,而根表上标记菌株NCD-2~(Rif)的菌体数量下降平缓。(4)利用盆栽试验检测滴灌条件下枯草芽胞杆菌NCD-2可湿性粉剂对棉花黄萎病的防治效果。在明确其安全使用剂量的基础上,检测不同滴灌剂量对棉花黄萎病的防治效果。采用5 kg/亩、3 kg/亩和1 kg/亩不同剂量生防菌剂滴灌处理后,其出苗率分别为84.38%、80.73%和79.17%,三个处理间出苗率差异不显著,与空白对照相比,5 kg/亩和3 kg/亩处理的棉花出苗率显著提高,1 kg/亩处理的棉花的苗率差异不显著,说明该制剂所使用的剂量均对棉花安全。防效测定结果表明,5 kg/亩生防菌剂使用剂量的防治效果最高,为40.19%,3 kg/亩的防治效果为23.95%,1 kg/亩的防治效果为15.50%,说明随着生防菌剂使用剂量的提高,其对棉花黄萎病的防治效果呈提高的趋势。
【学位单位】：河北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S435.62;S476
【文章目录】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 棉花黄萎病发生概况及主要防治方法
        1.1.1 棉花黄萎病的分布与危害
        1.1.2 常规防治方法
    1.2 棉花黄萎病的生物防治
        1.2.1 生防因子种类
        1.2.2 芽胞杆菌研究概况
        1.2.3 芽胞杆菌作用机制
    1.3 生防菌的定殖动态
        1.3.1 抗生素标记法
        1.3.2 生防细菌定殖
    1.4 生防菌制剂的使用方法
        1.4.1 生防菌的种类
        1.4.2 生防菌制剂的使用方法
    1.5 滴灌技术简介与应用概况
        1.5.1 滴灌技术
        1.5.2 滴灌施药技术
    1.6 本研究的目的意义
2 材料与方法
    2.1 供试材料
        2.1.1 所用培养基
        2.1.2 主要药品
        2.1.3 用具
        2.1.4 器材
    2.2 土壤的处理
    2.3 菌株NCD-2的定殖测定
        2.3.1 抗生素利福平作为抗性标记药剂母液的配制
        2.3.2 稀释涂布平板法
        2.3.3 枯草芽胞杆菌NCD-2菌株抗利福平标记菌株的筛选
        2.3.4 枯草芽胞杆菌NCD-2菌株标记菌株活性检测
Rif菌悬液的制备'>        2.3.5 标记菌株NCD-2^Rif菌悬液的制备
Rif在土壤中的定殖动态测定'>    2.4 标记菌株NCD-2^Rif在土壤中的定殖动态测定
Rif在棉花根际土壤与根表的消长规律'>    2.5 标记菌株NCD-2^Rif在棉花根际土壤与根表的消长规律
Rif在棉花根际土壤的定殖情况'>        2.5.1 标记菌株NCD-2^Rif在棉花根际土壤的定殖情况
Rif在棉花根表的定殖情况'>        2.5.2 标记菌株NCD-2^Rif在棉花根表的定殖情况
    2.6 “10亿活芽孢/克枯草芽胞杆菌可湿性粉剂”对棉花黄萎病的效果评价
        2.6.1 不同滴灌剂量对棉花出苗的影响
        2.6.2 不同滴灌剂量对棉花黄萎病盆栽效果的测定
    2.7 数据处理方法
3 结果与分析
    3.1 枯草芽胞杆菌NCD-2标记菌株的筛选与评价
        3.1.1 标记菌株的获得与野生型菌株菌落的形态比较
        3.1.2 标记菌株与野生型菌株生长动态比较
        3.1.3 枯草芽胞杆菌NCD-2标记菌株抑菌活性比较
    3.2 枯草芽胞杆菌NCD-2菌株在土壤中的定殖动态
    3.3 枯草芽胞杆菌NCD-2菌株在棉花根际土壤与根表的消长规律
    3.4 枯草芽胞杆菌可湿性粉剂防治棉花黄萎病的温室盆栽效果
4 讨论
    4.1 枯草芽胞杆菌NCD-2菌株抗性标记菌株的获得
Rif在土壤中的分布研究'>    4.2 关于标记菌株NCD-2^Rif在土壤中的分布研究
Rif在棉花根际土壤中的分布研究'>    4.3 关于标记菌株NCD-2^Rif在棉花根际土壤中的分布研究
    4.4 关于滴灌的使用技术
    4.5 关于枯草芽胞杆菌防治棉花黄萎病的研究
    4.6 枯草芽胞杆菌在植物病害生物防治中存在的问题和展望
5 结论
参考文献
作者简历
致谢
详细摘要

【参考文献】

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本文编号：2862988