杀菌剂嘧霉胺酶联免疫吸附检测的研究
发布时间：2021-03-27 13:30
嘧霉胺是一种内吸兼具熏蒸作用的苯胺嘧啶类杀菌剂,由于其对黄瓜和番茄等蔬菜的灰霉病均有很好的防治作用,不合理的施用导致果蔬类的嘧霉胺残留量经常超标,从而危害环境和人类的健康。现阶段,对嘧霉胺的残留检测方法有LC-MS、GC、BS和TLC等,但是这些方法有前处理复杂、对专业人员要求高和设备昂贵等缺点。所以应对嘧霉胺建立一种快速、灵敏、高效的检测方法。酶联免疫吸附测定（ELISA）方法具有上述优点外,同时还具有检测成本低、适合大量样品快速现场检测的需要。因此,酶联免疫分析技术对嘧霉胺残留检测具有实际意义。本研究探索了四条嘧霉胺半抗原（PMTH）的合成路线,并最终确定以对硝基苯胺和2-氯-4,6-二甲基嘧啶为起始原料,通过氨基取代、硝基还原和酯的氨解合成嘧霉胺半抗原,并得到经1H-NMR、TLC和MS的确证。采用混合酸酐法将PMTH和牛血清蛋白（BSA）偶联;采用活化酯法将PMTH和鸡卵清蛋白（OVA）偶联,经UV证明偶联物:PMTH-BSA（免疫原）、PMTH-OVA（包被抗原）均偶联成功,其中,PMTH与BSA的偶联比为14:1;PMTH和OVA的偶联比为6:1。将合...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
间接竞争法的原理
图 1-2 直接竞争法的原理Figure 1-2 Principle of direct competition method.2.3 双抗夹心法双抗体夹心法，是将含有已知抗体的抗血清包被在固相载体的表面，然后加测抗原，若抗原和抗体两者是特异性的，就会发生结合，经过洗涤会将多余抗洗掉。再加入与待测抗原能发生特异性反应的酶标抗体，形成“夹心”；加入酶的底物，若看到有色的酶解产物产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。双抗心法适用于测定大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子抗原，因其不能形两位点夹心。
图 1-2 直接竞争法的原理Figure 1-2 Principle of direct competition method1.4.2.3 双抗夹心法双抗体夹心法，是将含有已知抗体的抗血清包被在固相载体的表面，然后加待测抗原，若抗原和抗体两者是特异性的，就会发生结合，经过洗涤会将多余抗体洗掉。再加入与待测抗原能发生特异性反应的酶标抗体，形成“夹心”；加入该酶的底物，若看到有色的酶解产物产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。双抗夹心法适用于测定大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子抗原，因其不能形成两位点夹心。
【参考文献】：
期刊论文
[1]气质联用技术在食品农药残留测定中的技术应用[J]. 王志军. 食品安全导刊. 2017(30)
[2]高效液相色谱-化学发光法检测牛奶中磺胺类药物残留[J]. 段婕,李兴华,刘坤,张淑娟,马莉,石红梅. 分析化学. 2017(07)
[3]2014-2016年贵州省761份市售蔬菜中农药残留监测结果分析[J]. 杨蕙,刘怡娅,向红,何平,周亚娟,刘利亚. 现代预防医学. 2017(11)
[4]农药残留研究进展与展望[J]. 曾凯. 现代食品. 2017(09)
[5]氰基化合物水解的一种新方法[J]. 龙伟. 氯碱工业. 2016(09)
[6]固相微萃取技术与应用研究进展[J]. 李佳钰,吴雨杭,李昊原,刘丽艳,王莹,于湛. 山东化工. 2016(01)
[7]动物性食品中氨苯砜dcELISA的检测[J]. 郑小娇,张晶,张亚卓,史晨杉,王向红. 食品与发酵工业. 2015(07)
[8]固相微萃取（SPME）近几年的发展[J]. 傅若农. 分析试验室. 2015(05)
[9]制备抗五氯酚钠单克隆抗体及其应用于酶联免疫试剂盒的初步研究[J]. 刘欢,冯才伟,贾芳芳,冯静,彭鸽,张瑜. 食品工业科技. 2015(21)
[10]气相色谱法同时测定茶叶中10种有机磷农药残留[J]. 廖和菁,张雪春,胡礼渊,钟海翠,孙高英,刘瑞芳. 中国食品卫生杂志. 2015(01)
博士论文
[1]农药残留的快速检测和前处理技术的研究[D]. 钱立立.中国科学技术大学 2007
硕士论文
[1]三聚氰胺ELISA快速检测试剂盒的研制[D]. 岳慧慧.集美大学 2013
[2]有机磷农药单克隆抗体的制备[D]. 夏莹.华中师范大学 2010
[3]乐果酶联免疫试剂盒的研制[D]. 李兴霞.沈阳农业大学 2006
本文编号：3103595
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
间接竞争法的原理
图 1-2 直接竞争法的原理Figure 1-2 Principle of direct competition method.2.3 双抗夹心法双抗体夹心法，是将含有已知抗体的抗血清包被在固相载体的表面，然后加测抗原，若抗原和抗体两者是特异性的，就会发生结合，经过洗涤会将多余抗洗掉。再加入与待测抗原能发生特异性反应的酶标抗体，形成“夹心”；加入酶的底物，若看到有色的酶解产物产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。双抗心法适用于测定大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子抗原，因其不能形两位点夹心。
图 1-2 直接竞争法的原理Figure 1-2 Principle of direct competition method1.4.2.3 双抗夹心法双抗体夹心法，是将含有已知抗体的抗血清包被在固相载体的表面，然后加待测抗原，若抗原和抗体两者是特异性的，就会发生结合，经过洗涤会将多余抗体洗掉。再加入与待测抗原能发生特异性反应的酶标抗体，形成“夹心”；加入该酶的底物，若看到有色的酶解产物产生，说明在孔壁上存在相应的抗原。双抗夹心法适用于测定大分子抗原，不适用于测定半抗原及小分子抗原，因其不能形成两位点夹心。
【参考文献】：
期刊论文
[1]气质联用技术在食品农药残留测定中的技术应用[J]. 王志军. 食品安全导刊. 2017(30)
[2]高效液相色谱-化学发光法检测牛奶中磺胺类药物残留[J]. 段婕,李兴华,刘坤,张淑娟,马莉,石红梅. 分析化学. 2017(07)
[3]2014-2016年贵州省761份市售蔬菜中农药残留监测结果分析[J]. 杨蕙,刘怡娅,向红,何平,周亚娟,刘利亚. 现代预防医学. 2017(11)
[4]农药残留研究进展与展望[J]. 曾凯. 现代食品. 2017(09)
[5]氰基化合物水解的一种新方法[J]. 龙伟. 氯碱工业. 2016(09)
[6]固相微萃取技术与应用研究进展[J]. 李佳钰,吴雨杭,李昊原,刘丽艳,王莹,于湛. 山东化工. 2016(01)
[7]动物性食品中氨苯砜dcELISA的检测[J]. 郑小娇,张晶,张亚卓,史晨杉,王向红. 食品与发酵工业. 2015(07)
[8]固相微萃取（SPME）近几年的发展[J]. 傅若农. 分析试验室. 2015(05)
[9]制备抗五氯酚钠单克隆抗体及其应用于酶联免疫试剂盒的初步研究[J]. 刘欢,冯才伟,贾芳芳,冯静,彭鸽,张瑜. 食品工业科技. 2015(21)
[10]气相色谱法同时测定茶叶中10种有机磷农药残留[J]. 廖和菁,张雪春,胡礼渊,钟海翠,孙高英,刘瑞芳. 中国食品卫生杂志. 2015(01)
博士论文
[1]农药残留的快速检测和前处理技术的研究[D]. 钱立立.中国科学技术大学 2007
硕士论文
[1]三聚氰胺ELISA快速检测试剂盒的研制[D]. 岳慧慧.集美大学 2013
[2]有机磷农药单克隆抗体的制备[D]. 夏莹.华中师范大学 2010
[3]乐果酶联免疫试剂盒的研制[D]. 李兴霞.沈阳农业大学 2006
本文编号：3103595
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3103595.html
