柑橘全爪羧酸酯酶对甲氰菊酯解毒代谢功能的研究

发布时间：2021-05-18 09:38

　　柑橘全爪螨Panonychus citri（McGregor）是一种世界性分布的多食性害螨,在我国主要柑橘产区为害严重,且对多种杀螨剂产生了不同程度的抗性。羧酸酯酶（Carboxylesterases,CarEs,3.1.1.1）是一类重要的解毒代谢酶,其对杀虫（螨）剂代谢作用的增强是导致昆虫（螨）产生抗药性的重要原因之一。增效剂研究发现,羧酸酯酶专一性抑制剂磷酸三苯酯（TPP）显著提高甲氰菊酯对柑橘全爪螨的毒杀作用,暗示羧酸酯酶参与柑橘全爪螨对甲氰菊酯的解毒代谢作用。在前期羧酸酯酶基因鉴定的基础上,结合实时荧光定量PCR技术解析了柑橘全爪螨11个羧酸酯酶基因的时空表达模式,筛选出甲氰菊酯解毒代谢的相关基因PcE1、PcE7与PcE9。在此基础上,基于Bac-to-Bac真核表达系统,结合反向遗传学手段RNAi,深入探究了PcE1、PcE7与Pc E9基因在甲氰菊酯解毒代谢中的作用,以期为柑橘全爪螨抗药性的田间治理提供理论指导。本研究主要结果如下:1羧酸酯酶特异性抑制剂对甲氰菊酯的增效作用以柑橘全爪螨北碚种群为研究对象,采用叶碟浸渍法,测定了羧酸酯酶专一性抑制剂TPP对甲氰菊酯的增效作... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 柑橘全爪螨为害现状及抗性问题
    2 昆虫（螨）抗性机理
    3 羧酸酯酶及其介导的昆虫（螨）抗药性
        3.1 羧酸酯酶的分类
        3.2 羧酸酯酶介导昆虫（螨）抗药性产生的作用机制
    4 昆虫杆状病毒表达系统及其在基因功能研究中的应用
    5 RNA干扰技术及其在基因功能研究中的应用
引言
第二章 TPP对甲氰菊酯的增效作用研究
    1 材料与方法
        1.1 供试螨源
        1.2 主要仪器与试剂
        1.3 试验方法
    2 结果与分析
    3 小结
第三章 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因时空表达模式解析
    1 材料与方法
        1.1 供试螨源
        1.2 主要试剂及仪器
        1.3 试螨处理
        1.4 总RNA提取
        1.5 第一链cDNA合成
        1.6 定量PCR引物设计
        1.7 定量PCR
        1.8 数据分析
    2 结果与分析
        2.1 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因在北碚种群的表达模式
        2.2 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因在奉节种群的表达模式
        2.3 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因在万州种群的表达模式
        2.4 甲氰菊酯胁迫后柑橘全爪螨羧酸酯酶基因的表达模式解析
    3 小结
第四章 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因的真核表达研究
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂及仪器
        1.2 细胞培养
        1.3 PCR扩增及pMD-19T Simple载体构建
        1.4 杆状病毒表达载体构建
        1.5 细胞转染及病毒株获取
        1.6 PcE1、PcE7和PcE9重组蛋白表达
        1.7 PcE1、PcE7和PcE9表达产物酶活性测定
        1.8 羧酸酯酶活性测定
        1.9 细胞毒性测定
    2 结果与分析
        2.1 PCR扩增及pMD-19T Simple载体构建
        2.2 pFastBac- PcEs重组质粒的构建
        2.3 Bacmid- PcEs重组杆粒的构建
        2.4 重组杆粒对昆虫细胞的转染
        2.5 PcE1、PcE7和PcE9重组蛋白的酶活性测定
        2.6 细胞毒性测定
    3 小结
第五章 基于RNAi的柑橘全爪螨羧酸酯酶基因功能分析
    1 材料与方法
        1.1 供试虫源
        1.2 主要试剂及仪器
        1.3 dsRNA引物设计
        1.4 dsRNA合成
        1.5 dsRNA检测
        1.6 RNAi处理
        1.7 沉默效率的检测
        1.8 生物测定
    2 结果与分析
        2.1 dsRNA合成
        2.2 沉默效率检测
        2.3 甲氰菊酯生物测定
    3 小结
第六章 主要结果及研究展望
    1 主要结果
    2 研究展望
参考文献
在读期间发表论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]飞蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表达及酶学特性分析[J]. 宋慧芳,李应龙,马恩波,张建珍.  中国农业科学. 2016(21)
[2]棉蚜啶虫脒不同品系解毒酶活性测定和增效剂作用的研究[J]. 郭天凤,周晶,叶玉霞,王国平,蔡晓莉,刘铨义,曾庆涛,冯洋,赵富强,李家胜,马野萍.  新疆农业科学. 2015(07)
[3]飞蝗羧酸酯酶基因LmCesF1的时空表达及与杀虫剂耐受性的关系[J]. 张建琴,葛娉婷,李大琪,王燕,张建珍,马恩波.  中国农业科学. 2014(08)
[4]甜菜夜蛾UAP的克隆、时空表达及RNAi研究[J]. 陈洁,陈宏鑫,姚琼,张文庆.  中国农业科学. 2014(07)
[5]截形叶螨抗哒螨灵品系和敏感品系体内解毒酶活性的变化[J]. 宋丽雯,沈一凡,岳秀利,郭金梅,沈慧敏.  昆虫学报. 2014(03)
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博士论文
[1]飞蝗羧酸酯酶基因转录组分析及杀虫剂解毒功能研究[D]. 张建琴.山西大学 2014
[2]柑橘全爪螨细胞色素P450及其相关基因的鉴定和表达模式研究[D]. 丁天波.西南大学 2014
[3]二斑叶螨对甲氰菊酯的抗性分子机理研究[D]. 高新菊.甘肃农业大学 2012
[4]棉铃虫羧酸酯酶表达及解毒作用研究[D]. 李永强.西北农林科技大学 2012

硕士论文
[1]山楂叶螨的抗药性监测及其对哒螨灵和阿维菌素的抗性机理研究[D]. 彭丽娟.西北农林科技大学 2015
[2]棉铃虫羧酸酯酶基因克隆及原核表达[D]. 吴美玲.西北农林科技大学 2014
[3]朱砂叶螨羧酸酯酶基因TCE2原核表达研究[D]. 王祥尊.西南大学 2014
[4]家蚕羧酸酯酶Bmbe2基因的克隆及功能研究[D]. 张作旺.重庆大学 2014
[5]柑桔全爪螨羧酸酯酶CarEs生化及分子毒理学特性研究[D]. 张昆.西南大学 2013
[6]朱砂叶螨酯酶基因克隆及其mRNA表达研究[D]. 薛传华.西南大学 2008



本文编号：3193568