家蚕热休克蛋白BmHsp60在BmNPV侵染过程的作用研究

发布时间：2021-05-24 08:59

　　家蚕是重要的泌丝经济昆虫,在我国有悠久的驯养历史,由于昆虫本身缺乏哺乳动物的获得性免疫系统,使之易受病原微生物的影响,我国每年因蚕病造成的经济损失非常严重,其中家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedroshivirus,BmNPV）是养蚕业主要防控病原。Hsp60是热休克蛋白中重要的一员,它不但能够参与蛋白质的正确折叠,对高温、缺氧、饥饿等产生应答,同时也是昆虫生长发育的必要因子。此外,Hsp60在昆虫先天性免疫过程中也扮演了重要作用。有学者通过病毒覆盖检测发现了Hsp60是BmNPV直接相互作用的蛋白之一,本课题小组前期研究也证明了Hsp60受到BmNPV极晚期表达因子LEF-11劫持,参与了病毒增殖。但Hsp60促进BmNPV增殖的具体机制仍然未知,本研究通过钓取家蚕Hsp60相互作用蛋白,鉴定了它们对BmNPV增殖和细胞ATP水平的影响,初步探究了它们之间的调控关系,对BmNPV与宿主相互作用的解析以及侵染调控网络的绘制具有一定意义,并取得如下结果:1.家蚕BmHsp60相互作用蛋白鉴定首先验证了Hsp60能够促进BmNPV在细胞水平的增殖,同时发... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 热休克蛋白研究进展
        1.1.1 热休克家族基因概述
        1.1.2 热休克蛋白Hsp60研究进展
        1.1.3 Hsp60在病毒侵染过程中作用的研究
        1.1.4 昆虫热休克蛋白Hsp60研究进展
    1.2 杆状病毒研究
        1.2.1 杆状病毒概述
        1.2.2 杆状病毒与宿主相互作用
        1.2.3 BmNPV与宿主相互作用
第二章 引言
    2.1 研究背景与目的意义
    2.2 主要研究内容
    2.3 技术路线
第三章 家蚕BmHsp60相互作用蛋白鉴定
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 试剂及溶液配置
        3.1.3 主要仪器
        3.1.4 实验方法与步骤
    3.2 结果与分析
        3.2.1 BmHsp60过表达载体转录分析
        3.2.2 BmHsp60对BmNPV增殖的影响
        3.2.3 BmHsp60相互作用候选蛋白的钓取
        3.2.4 BmHsp60相互作用候选蛋白的验证
        3.2.5 BmHsp60相互作用蛋白亚细胞定位研究
        3.2.6 BmANT1表达特征鉴定
    3.3 讨论
第四章 BmANT1对BmNPV增殖的影响
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 试剂及溶液配置
        4.1.3 主要仪器
        4.1.4 实验方法与步骤
    4.2 结果与分析
        4.2.1 BmANT1过表达载体转录分析
        4.2.2 过表达BmANT1对BmNPV增殖的影响
        4.2.3 BmANT1基因的CRISPR/Cas9敲除效果检测
        4.2.4 BmANT1在家蚕细胞中CRISPR/Cas9敲除对BmNPV增殖的影响
    4.3 讨论
第五章 BmHsp60和BmANT1对BmNPV增殖的共同影响
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 试剂及溶液配置
        5.1.3 主要仪器
        5.1.4 实验方法与步骤
    5.2 结果与分析
        5.2.1 过表达BmHsp60同时过表达或敲除BmANT1对BmNPV增殖的影响
        5.2.2 过表达BmANT1同时过表达或敲除BmHsp60对BmNPV增殖的影响
        5.2.3 BmHsp60与BmANT1在BmNPV感染过程中对细胞ATP水平影响
    5.3 讨论
第六章 BmHsp60调控BmANT1机制初探
    6.1 材料与方法
        6.1.1 实验材料
        6.1.2 试剂及溶液配置
        6.1.3 主要仪器
        6.1.4 实验方法与步骤
    6.2 结果与分析
        6.2.1 BmHsp60对BmANT1转录水平调控研究
        6.2.2 BmNPV对宿主TLR4受体通路激活的研究
        6.2.3 NF-κB抑制剂PDTC对BmNPV增殖及BmANT1表达影响
    6.3 讨论
第七章 结论与展望
    7.1 结论
    7.2 展望
论文创新点
参考文献
在读期间发表论文及参加课题
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]昆虫杆状病毒组学研究进展[J]. 梁振普,李路军,张俊庆,刘雅静,吴慧,李鹏娟,冯文霞,张小霞.  河南农业科学. 2017(08)
[2]HSP60在糖尿病诱导的晶状体上皮细胞凋亡中的作用[J]. 付书华,肖昊戎,刘菲,仇晶晶,张倩,游志鹏.  广东医学. 2015(24)
[3]Toll样受体4拮抗剂防治兔蛛网膜下腔出血后迟发型血管痉挛[J]. 易帅,霍晓川,甄为,罗俊生.  解放军医学院学报. 2014(02)
[4]热休克蛋白免疫作用的研究进展[J]. 罗靖旻,罗建新.  医学综述. 2013(07)
[5]杆状病毒与宿主细胞的相互作用[J]. 王春苗,张艳阳.  河北北方学院学报(自然科学版). 2012(02)
[6]家蚕核型多角体病毒水平转移基因分析[J]. 段海蓉,丘德彬,贡成良,黄茉莉.  遗传. 2011(06)
[7]杆状病毒凋亡抑制基因的研究进展[J]. 余倩.  生物技术通报. 2011(02)
[8]杆状病毒在昆虫中的持续感染[J]. 翁庆北,庞义.  环境昆虫学报. 2010(01)
[9]HSP60免疫学特性与疾病的关系[J]. 王鹏,井申荣,曾韦锟.  云南大学学报(自然科学版). 2009(S1)
[10]杆状病毒进化研究进展[J]. 唐平,单晓红,张雨,徐攀,张志芳,沈桂芳.  生物技术通报. 2008(06)

博士论文
[1]家蚕表皮蛋白基因的表达谱分析及表皮蛋白BmorCPT1的功能研究[D]. 梁九波.西南大学 2012

硕士论文
[1]家蚕中肠及围食膜与BmNPV互作蛋白的鉴定[D]. 耿磊.安徽农业大学 2016
[2]家蚕核型多角体病毒（BmNPV）增殖复制关键基因的筛选与鉴定[D]. 何倩.西南大学 2014



本文编号：3203935