核桃多酚对马拉硫磷和毒死蜱免疫毒性的保护作用
发布时间：2021-06-07 06:11
马拉硫磷（Malathion,MT）和毒死蜱（Chlorpyrifos,CPF）是两种常见的有机磷农药,因其能够有效抑制病虫害,提高作物产量而在世界范围内广泛使用。核桃多酚提取物（Walnut Polyphenol Extract,WPE）具有很强的抗氧化、抗炎和抗癌等特性,能有效缓解有毒物质对人类及其它哺乳动物造成的损伤。本论文在确定MT和CPF对小鼠脾淋巴细胞具有免疫毒性的基础上,进一步研究WPE对MT和CPF所致免疫毒性的影响,并探讨其相关机制。主要研究结果如下:（1）MT和CPF均显著抑制脾细胞活力,而WPE以浓度依赖性的方式有效缓解MT和CPF对脾细胞活力的抑制作用。（2）MT选择性抑制脾T淋巴细胞活力,显著抑制CD3+、CD4+和CD8+T细胞的百分含量,而CPF选择性降低脾B淋巴细胞活力,显著减少CD19+B的含量。WPE处理显著增加暴露于MT和CPF的脾淋巴细胞活力,上调脾淋巴细胞亚群百分比含量,有效缓解MT和CPF对脾淋巴细胞的增殖毒性作用。（3）MT显著降低T细胞相关细胞因子白细...
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
细胞的增殖毒性3.1.1马拉硫磷和毒死蜱对脾细胞增殖的影响为研究MT和CPF对小鼠脾细胞增殖的影响，以培养基为对照组，使用不同浓度的MT和CPF（10-7M、10-6M、10-5M和10-4M）处理小鼠脾细胞48h后，用MTT法测定脾细胞活力。结果如图3.1所示，与对照组相比，MT和CPF均抑制脾细胞活力，且在此浓度范围内MT和CPF对细胞活力的抑制具有浓度依赖性。在10-5M的暴露浓度下，MT和CPF均具有显著细胞增殖毒性，对脾细胞活力产生明显抑制作用，分别使脾细胞活力降至对照的87.8%和86.1%。所以，10-5M被选为后续所有实验中MT和CPF的浓度。图3.1MT和CPF对脾细胞活力的影响Fig.3.1EffectsofMTandCPFonsplenocyteviability注：图A，用不同浓度MT处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；图B，用不同浓度CPF处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；10-7、10-6、10-5、10-4分别代表处理脾细胞的农药浓度；与对照组相比，*为显著性差异，即p＜0.05，**为极显著性差异，即p＜0.01。3.1.2核桃多酚缓解马拉硫磷和毒死蜱对脾细胞的增殖毒性为研究WPE对MT和CPF抑制脾细胞增殖的影响，以培养基为对照组，10-5M的MT和CPF为染毒组，将不同浓度的WPE（1.0、5.0和10.0μg/mL）和MT或不同浓度的WPE（1.0、5.0和10.0μg/mL）和CPF处理脾细胞48h，用MTT法检测脾细胞活力。实验结果如图3.2所示，与单独的MT和CPF处理组相比，1.0~10.0μg/mL的WPE以浓度依赖性的方式提高了农药处理组的脾细胞活力。1.0~10.0μg/mL的WPE共同培养可使暴露于MT的脾细胞活力由MT组的87.8%分别恢复至96.4%、104.3%和109.3%。同样的，1.0~10.0μg/mL的WPE使CPF处理的脾细胞活力由CPF组的86.1%分别提高至95.4%、98.7%和111.7%，且均具有显著性。这些结果表明WPE
核桃多酚对马拉硫磷和毒死蜱免疫毒性的保护作用20缓解MT和CPF对脾细胞活力的抑制作用，抑制MT和CPF的增殖毒性。为研究单独WPE处理对脾细胞增殖的影响，以培养基为对照组，分别用1.0~10.0μg/mL的WPE处理脾细胞48h，用MTT法测定细胞活力。如图3.2所示，结果表明，与对照组相比，1.0~10.0μg/mL的WPE单独处理不会显著影响脾细胞活力。上述结果表明，WPE虽然缓解MT和CPF诱导的脾细胞增殖毒性，但其本身对脾细胞活力没有显著影响。图3.2WPE对脾细胞和暴露于MT和CPF的脾细胞活力的影响Fig.3.2EffectsofWPEoncellviabilityinsplenocytesandsplenocytesexposedtoMTandCPF注：图A，用不同浓度的WPE（1、5和10μg/mL）单独或与10-5MMT联合处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；图B，用不同浓度的WPE（1、5和10μg/mL）单独或与10-5MCPF联合处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；与对照组相比，*为显著性差异，即p＜0.05，**为极显著性差异，即p＜0.01；与MT或CPF组相比：#为显著性差异，即p<0.05，##为极显著性差异，即p<0.01。3.1.3不同抗氧化剂对马拉硫磷和毒死蜱诱导的脾细胞增殖毒性的影响为研究不同抗氧化剂对MT和CPF抑制脾细胞增殖的影响，选择三种有代表性、抗氧化能力强的抗氧化剂鞣花酸（EA）、原花青素（PC）和槲皮素（QUE）作为阳性对照，以培养基为对照组，10-5M的MT和CPF为染毒组，用MTT法检测脾细胞活力，研究相同浓度的WPE、EA、PC和QUE对MT和CPF抑制脾细胞增殖的影响。实验结果如图3.3所示，与EA、PC和QUE处理组相比，相同浓度的WPE对脾细胞增殖的恢复作用更显著。这些结果表明WPE对MT和CPF诱导的脾细胞增殖毒性的保护作用比相同浓度的EA、PC和QUE更强。
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪甲苷对阿尔茨海默症小鼠脑内氧化应激和NADPH氧化酶蛋白表达的影响[J]. 赵启跃,姚遥,郑萍,李南,王伟,韩欣益,李娟. 宁夏医科大学学报. 2018(11)
[2]川芎提取物对电离辐照损伤实验小鼠脾脏组织细胞凋亡相关蛋白表达的影响[J]. 李敏,赵领,刘真宏,罗芳芳,易辉燕,赵德华,唐文诚,王继生. 中国药理学通报. 2018(11)
[3]果品中有机磷农药联合毒性研究进展[J]. 张思远,方琪,焦必宁. 果树学报. 2017(01)
[4]2015年我国农药生产与使用概况[J]. 束放,熊延坤,韩梅. 农药科学与管理. 2016(07)
[5]4种常见残留农药联合作用对小鼠免疫毒性研究[J]. 刘英华,张大龙,张静姝,张静,姜淑卿,李树飞. 毒理学杂志. 2016(01)
[6]有机磷农药的免疫毒性[J]. 邱丽娟,张重阳,刘宇鹏. 灾害医学与救援(电子版). 2015(04)
[7]氧化乐果长期暴露对大鼠骨骼肌氧化损伤的研究[J]. 时佳宏,王东洲,侯雪,潘奇正,王清,范悦昕,安立峰. 中国实验诊断学. 2013(08)
[8]2010年黑龙江省市售蔬菜中有机磷农药的监测结果[J]. 付宇,陈彦凤,刘长福,孙艳芳,金洪伟,张毅. 职业与健康. 2012(19)
[9]圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表达的影响[J]. 雷红宇,袁慧,邬静,文利新,袁莉芸,袁志航,郭乐,晏辉云. 中国兽医学报. 2011(01)
[10]核桃油功效成分研究进展[J]. 赵声兰,陈朝银,葛锋,韩本勇. 云南中医学院学报. 2010(06)
硕士论文
[1]中国七个主产区核桃综合品质差异比较[D]. 李世亮.中国林业科学研究院 2018
[2]有机磷农药毒死蜱低剂量重复染毒致雄性大鼠生殖毒性及其作用机制研究[D]. 焦利飞.中国人民解放军军事医学科学院 2011
本文编号：3216035
【文章来源】：北京林业大学北京市 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
技术路线图
细胞的增殖毒性3.1.1马拉硫磷和毒死蜱对脾细胞增殖的影响为研究MT和CPF对小鼠脾细胞增殖的影响，以培养基为对照组，使用不同浓度的MT和CPF（10-7M、10-6M、10-5M和10-4M）处理小鼠脾细胞48h后，用MTT法测定脾细胞活力。结果如图3.1所示，与对照组相比，MT和CPF均抑制脾细胞活力，且在此浓度范围内MT和CPF对细胞活力的抑制具有浓度依赖性。在10-5M的暴露浓度下，MT和CPF均具有显著细胞增殖毒性，对脾细胞活力产生明显抑制作用，分别使脾细胞活力降至对照的87.8%和86.1%。所以，10-5M被选为后续所有实验中MT和CPF的浓度。图3.1MT和CPF对脾细胞活力的影响Fig.3.1EffectsofMTandCPFonsplenocyteviability注：图A，用不同浓度MT处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；图B，用不同浓度CPF处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；10-7、10-6、10-5、10-4分别代表处理脾细胞的农药浓度；与对照组相比，*为显著性差异，即p＜0.05，**为极显著性差异，即p＜0.01。3.1.2核桃多酚缓解马拉硫磷和毒死蜱对脾细胞的增殖毒性为研究WPE对MT和CPF抑制脾细胞增殖的影响，以培养基为对照组，10-5M的MT和CPF为染毒组，将不同浓度的WPE（1.0、5.0和10.0μg/mL）和MT或不同浓度的WPE（1.0、5.0和10.0μg/mL）和CPF处理脾细胞48h，用MTT法检测脾细胞活力。实验结果如图3.2所示，与单独的MT和CPF处理组相比，1.0~10.0μg/mL的WPE以浓度依赖性的方式提高了农药处理组的脾细胞活力。1.0~10.0μg/mL的WPE共同培养可使暴露于MT的脾细胞活力由MT组的87.8%分别恢复至96.4%、104.3%和109.3%。同样的，1.0~10.0μg/mL的WPE使CPF处理的脾细胞活力由CPF组的86.1%分别提高至95.4%、98.7%和111.7%，且均具有显著性。这些结果表明WPE
核桃多酚对马拉硫磷和毒死蜱免疫毒性的保护作用20缓解MT和CPF对脾细胞活力的抑制作用，抑制MT和CPF的增殖毒性。为研究单独WPE处理对脾细胞增殖的影响，以培养基为对照组，分别用1.0~10.0μg/mL的WPE处理脾细胞48h，用MTT法测定细胞活力。如图3.2所示，结果表明，与对照组相比，1.0~10.0μg/mL的WPE单独处理不会显著影响脾细胞活力。上述结果表明，WPE虽然缓解MT和CPF诱导的脾细胞增殖毒性，但其本身对脾细胞活力没有显著影响。图3.2WPE对脾细胞和暴露于MT和CPF的脾细胞活力的影响Fig.3.2EffectsofWPEoncellviabilityinsplenocytesandsplenocytesexposedtoMTandCPF注：图A，用不同浓度的WPE（1、5和10μg/mL）单独或与10-5MMT联合处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；图B，用不同浓度的WPE（1、5和10μg/mL）单独或与10-5MCPF联合处理脾细胞48h后进行细胞增殖分析实验；与对照组相比，*为显著性差异，即p＜0.05，**为极显著性差异，即p＜0.01；与MT或CPF组相比：#为显著性差异，即p<0.05，##为极显著性差异，即p<0.01。3.1.3不同抗氧化剂对马拉硫磷和毒死蜱诱导的脾细胞增殖毒性的影响为研究不同抗氧化剂对MT和CPF抑制脾细胞增殖的影响，选择三种有代表性、抗氧化能力强的抗氧化剂鞣花酸（EA）、原花青素（PC）和槲皮素（QUE）作为阳性对照，以培养基为对照组，10-5M的MT和CPF为染毒组，用MTT法检测脾细胞活力，研究相同浓度的WPE、EA、PC和QUE对MT和CPF抑制脾细胞增殖的影响。实验结果如图3.3所示，与EA、PC和QUE处理组相比，相同浓度的WPE对脾细胞增殖的恢复作用更显著。这些结果表明WPE对MT和CPF诱导的脾细胞增殖毒性的保护作用比相同浓度的EA、PC和QUE更强。
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪甲苷对阿尔茨海默症小鼠脑内氧化应激和NADPH氧化酶蛋白表达的影响[J]. 赵启跃,姚遥,郑萍,李南,王伟,韩欣益,李娟. 宁夏医科大学学报. 2018(11)
[2]川芎提取物对电离辐照损伤实验小鼠脾脏组织细胞凋亡相关蛋白表达的影响[J]. 李敏,赵领,刘真宏,罗芳芳,易辉燕,赵德华,唐文诚,王继生. 中国药理学通报. 2018(11)
[3]果品中有机磷农药联合毒性研究进展[J]. 张思远,方琪,焦必宁. 果树学报. 2017(01)
[4]2015年我国农药生产与使用概况[J]. 束放,熊延坤,韩梅. 农药科学与管理. 2016(07)
[5]4种常见残留农药联合作用对小鼠免疫毒性研究[J]. 刘英华,张大龙,张静姝,张静,姜淑卿,李树飞. 毒理学杂志. 2016(01)
[6]有机磷农药的免疫毒性[J]. 邱丽娟,张重阳,刘宇鹏. 灾害医学与救援(电子版). 2015(04)
[7]氧化乐果长期暴露对大鼠骨骼肌氧化损伤的研究[J]. 时佳宏,王东洲,侯雪,潘奇正,王清,范悦昕,安立峰. 中国实验诊断学. 2013(08)
[8]2010年黑龙江省市售蔬菜中有机磷农药的监测结果[J]. 付宇,陈彦凤,刘长福,孙艳芳,金洪伟,张毅. 职业与健康. 2012(19)
[9]圆弧青霉菌毒素—青霉酸对小鼠脾脏组织细胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表达的影响[J]. 雷红宇,袁慧,邬静,文利新,袁莉芸,袁志航,郭乐,晏辉云. 中国兽医学报. 2011(01)
[10]核桃油功效成分研究进展[J]. 赵声兰,陈朝银,葛锋,韩本勇. 云南中医学院学报. 2010(06)
硕士论文
[1]中国七个主产区核桃综合品质差异比较[D]. 李世亮.中国林业科学研究院 2018
[2]有机磷农药毒死蜱低剂量重复染毒致雄性大鼠生殖毒性及其作用机制研究[D]. 焦利飞.中国人民解放军军事医学科学院 2011
本文编号：3216035
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