球孢白僵菌侵染柞蚕的病理过程及分子生物学研究

发布时间：2021-06-13 04:22

　　白僵病（White muscardine）是柞蚕Antheraea pernyi Guérin-Méneville被球孢白僵菌Beauveria bassiana侵染所致的一种真菌病,一旦流行将对蚕业造成巨大的经济损失。目前人们对白僵病的防御还缺乏有效的治理手段,对白僵菌侵染柞蚕的分子机制更是知之甚少。本研究利用电镜技术观察了球孢白僵菌侵染柞蚕蛹体壁和脂肪体的病变过程。同时,利用qRT-PCR技术检测了柞蚕染病后,肽聚糖识别蛋白A（Ap-PGRP-A）、β-1,3-葡聚糖识别蛋白（βGRP）、类免疫球蛋白（Ap-hemolin-like）、免疫凝集素A（ImmulectinA）、载脂蛋白Ⅲ（Aplipophorin-Ⅲ）、真菌蛋白酶抑制剂8（ApCP8）、丝氨酸蛋白酶抑制剂4（Sepin like protein4）、溶菌酶（Lysozyme）、防御蛋白（ApDef）、热休克蛋白21.4（Ap-sHSP21.4）、谷胱甘肽转移酶θ（Glutathione S-transferase theta）和核转录因子（Ap-dorsalA）等12个免疫基因在血淋巴、脂肪体和体壁等3个组织中的表达... 

【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
1 综述
    1.1 球孢白僵菌的研究进展
        1.1.1 球孢白僵菌的概述
        1.1.2 球孢白僵菌的分类鉴定技术
        1.1.3 影响球孢白僵菌致病性的因素
        1.1.4 球孢白僵菌侵染昆虫的机制
    1.2 昆虫被白僵菌侵染后的病理变化
        1.2.1 白僵菌侵染昆虫体壁的电镜观察
        1.2.2 白僵菌侵染昆虫脂肪体的电镜观察
    1.3 昆虫的免疫应答
        1.3.1 昆虫的先天免疫
        1.3.2 柞蚕免疫相关基因
    1.4 目的意义
2 球孢白僵菌的分离和鉴定
    2.1 实验材料与实验设备
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 白僵菌菌株的分离
        2.2.2 形态学鉴定
        2.2.3 分子生物学鉴定
    2.3 结果与分析
        2.3.1 形态学鉴定结果
        2.3.2 分子生物学鉴定结果
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 球孢白僵菌侵染柞蚕的电镜观察
    3.1 实验材料与实验设备
        3.1.1 供试菌种和昆虫
        3.1.2 实验试剂
        3.1.3 实验仪器
    3.2 实验方法
        3.2.1 球孢白僵菌分生孢子的收集
        3.2.2 球孢白僵菌穿透柞蚕体壁的扫描电镜观察
        3.2.3 球孢白僵菌感染柞蚕脂肪体的透射电镜观察
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 球孢白僵菌侵染柞蚕蛹的临床症状
        3.3.2 球孢白僵菌注射侵染柞蚕的扫描电镜观察
        3.3.3 球孢白僵菌穿透柞蚕体壁的扫描电镜观察
        3.3.4 球孢白僵菌侵染柞蚕脂肪体的透射电镜观察
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 柞蚕被球孢白僵菌侵染后免疫基因的差异表达分析
    4.1 实验材料及仪器设备
        4.1.1 供试菌种和昆虫
        4.1.2 实验试剂
        4.1.3 实验仪器
    4.2 实验方法
        4.2.1 球孢白僵菌的接种
        4.2.2 柞蚕各组织的收集
        4.2.3 实时定量PCR引物设计
        4.2.4 总RNA的提取及cDNA的获得
        4.2.5 实时定量荧光PCR反应
        4.2.6 数据统计分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 模式识别受体基因的差异表达分析
        4.3.2 其他免疫相关基因的差异表达分析
    4.4 讨论
    4.5 小结
5 柞蚕被球孢白僵菌侵染后的生理指标检测
    5.1 实验材料及仪器设备
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 实验试剂
        5.1.3 实验仪器
    5.2 实验方法
        5.2.1 球孢白僵菌的接种
        5.2.2 柞蚕各组织的收集
        5.2.3 蛋白质定量测试
        5.2.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
        5.2.5 过氧化物酶(POD)活性测定
        5.2.6 过氧化氢酶(CAT)活性测定
        5.2.7 数据统计分析
    5.3 结果与分析
        5.3.1 柞蚕被球孢白僵菌侵染后SOD酶活性变化
        5.3.2 柞蚕被球孢白僵菌侵染后POD酶活性变化
        5.3.3 柞蚕被球孢白僵菌侵染后CAT酶活性变化
    5.4 讨论
    5.5 小结
结论
展望
参考文献
附录A 论文中Bba1的ITS序列
附录B 论文中所用缩略词
攻读硕士学位期间发表学术论文情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]柞蚕核型多角体病毒侵染对柞蚕幼虫体内部分保护酶活性的影响[J]. 贾姝,宋策,赫英姿,刘孝良,于庭洪,赵翀,左玲玲.  蚕业科学. 2016(06)
[2]菜青虫感染金龟子绿僵菌后体内几种保护酶活性的变化[J]. 李世广,窦婷婷,付小伶,刘祝琴,何超.  植物保护. 2016(03)
[3]柞蚕真菌蛋白酶抑制剂基因CP8的克隆与表达分析[J]. 钱岑,王芳,李胜,刘朝良.  安徽农业大学学报. 2015(05)
[4]嗜菌异小杆线虫侵染后暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟幼虫脂肪体和中肠组织超微结构观察[J]. 吴文丹,孙昊雨,席景会,尹姣,张帅,曹雅忠,李克斌,肖春.  昆虫学报. 2015(08)
[5]布氏白僵菌侵染杨干象幼虫体壁的扫描电镜及透射电镜观察[J]. 曹庆杰,迟德富,宇佳,冉亚丽.  北京林业大学学报. 2015(05)
[6]不同微生物诱导柞蚕溶菌酶基因的表达分析[J]. 宋佳,姜义仁,王勇,孙影,杨瑞生,石生林,秦利.  蚕业科学. 2013(04)
[7]家蚕滞育卵与非滞育卵中几种关键酶活性的比较[J]. 范兰芬,钟杨生,林健荣.  昆虫学报. 2011(11)
[8]ApNPV侵染对柞蚕蛹体内保护酶活性的影响[J]. 石生林,张涛,李群,王学英.  沈阳农业大学学报. 2008(05)
[9]绿僵菌侵染小菜蛾幼虫过程的透射电镜观察[J]. 王音,雷仲仁,张青文,问锦曾.  昆虫学报. 2006(06)

博士论文
[1]家蚕防御球孢白僵菌感染相关免疫基因的研究[D]. 吕丁丁.江苏科技大学 2017

硕士论文
[1]三个柞蚕脂肪酶基因的克隆及表达分析[D]. 方素云.大连理工大学 2014
[2]柞蚕模式识别受体βGRP、immulectins基因的克隆及表达分析[D]. 李凤娟.大连理工大学 2012



本文编号：3226985