番木瓜畸形花叶病毒弱毒突变体的筛选及其交叉保护作用

发布时间:2021-06-24 08:22
  番木瓜是海南最重要的热带经济果树之一,而番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)一直是影响番木瓜产业发展的主要限制因素。自本研究组于2012年在转基因抗RPSV番木瓜植株上新发现了番木瓜畸形花叶病毒(Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV),PLDMV危害呈逐年上升趋势,逐渐上升为威胁海南番木瓜种植的毁灭性病害,已成为我国番木瓜生产上亟待解决的问题。目前,PLDMV在栽培技术上还很难通过化学防治的方法予以防控。虽然台湾中兴大学已研发出抗PLDMV和PRSV的双抗转基因木瓜,但存在转基因植物的生态风险和食品安全性等方面问题,使转基因番木瓜的推广应用受到极大限制。为了探寻一种对环境友好、高效便捷、应用前景广的绿色防控PLDMV方法。本研究采取交叉保护策略开展PLDMV的防控研究,交叉保护作为植物病毒病害的有效防治手段,已成功应用于柑橘衰退病、西葫芦花叶病和番木瓜环斑病等的防治。而弱毒株的获取是交叉保护应用的关键,为了快速获得用于PLDMV防治的弱毒株,本研究利用人工定点突变策略快速构建并筛选出具有交叉保护作用的PLD... 

【文章来源】:海南大学海南省 211工程院校

【文章页数】:60 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

番木瓜畸形花叶病毒弱毒突变体的筛选及其交叉保护作用


图1.番木瓜畸形花叶病毒病症状特点??Fig.l?Symptoms?of?Papaya?leaf?distortion?mosaic?virus?disease??

弱毒,症状观察,番木瓜,突变体


而接种空载体的阴性对照组番木瓜叶片未观察到绿色荧光(图4C)。??接种后40天、50天、60天分别进行病症观察,接种野生型p35S-PLDMV-GFP阳性对??照组番木瓜顶端叶片出现绿岛,畸形越来越严重,呈现出鸡爪状、丝状叶(图5B)。而接??种弱毒突变体克隆?P35S-PLDMV-GFP-A、p35S-PLDMV-GFP-B、p35S-PLDMV-GFP-C、??p35S-PLDMV-GFP-D、p35S-PLDMV-GFP-E的番木瓜叶片未见明显病症,与接种空载体的??阴性对照组基本一致。在UV灯下进行荧光观察的结果显示,与接种后30天的观察结果一??致,仅接种野生型P35S-PLDMV-GFP阳性对照组的番木瓜叶片能观察到很强的绿色荧光,??而接种弱毒突变体克隆?P35S-PLDMV-GFP-A、p35S-PLDMV-GFP-B、p35S-PLDMV-GFP-C、??p35S-PLDMV-GFP-D、p35S-PLDMV-GFP-E和阴性对照组的番木瓜叶片均未观察到绿色荧??光(图5A)。??接种60天后,接种弱毒突变体克隆p35S-PLDMV-GFP-A、p35S-PLDMV-GFP-B、??p35S-PLDMV-GFP-C、p35S-PLDMV-GFP-D?和?p35S-PLDMV-GFP-E?的番木瓜叶片上未见明??显病症,但在茎杆上局部有轻微的、少量水溃状出现(图6A),接种野生型p35S-PLDMV-GFP??阳性对照组的番木瓜茎杆上出现严重水溃状,而接种空载体的阴性对照组茎杆上未见水渍??状(图6A)。切取茎杆上水渍状表皮在荧光显微镜下观察时,阳性对照组的水渍部分可观??察到很强的绿色荧光

弱毒,突变体,显微镜,症状观察


mCherry、p35S-PLDMV-GFP-C+p35S-PLDMV-mCheny、p35S-PLDMV-GFP-D+p35S-PLDMV-??mCheny、p35S-PLDMV-GFP-E+p35S-PLDMV-mCherry?)与阴性对照组(pGreenII-35S+??pGreenII-35S)?—致,未见明显的病症出现(图9A,B)。表明在接种30天后,5种弱毒突??变体均表现出一定的交叉保护作用。??攻毒50天后,阳性对照组(pGreenn-35S+p35S-PLDMV-mCherry)的番木瓜植株顶端??发病叶皱缩、卷曲、畸形愈加明显。而保护接种弱毒突变体克隆P35S-PLDMV-GFP-A和??P35S-PLDMV-GFP-C?的实验组(p35S-PLDMV-GFP-A+p35S-PLDMV-mCheny、p35S-PLDMV-??GFP-C+p35S-PLDMV-mCheny)叶片开始黄化,有斑驳的花纹出现;保护接种弱毒突变体??克隆?P35S-PLDMV-GFP-D?的实验组(pSSS-PLDMV-CHT-D+pSSS-PLDMV-mCheny)也有叶??片黄化症状出现,但保护接种弱毒突变体克隆P35S-PLDMV-GFP-B和p35S-PLDMV-GFP-E??的实验组(p35S-PLDMV-GFP-B+p35S-PLDMV-mCherry、p35S-PLDMV-GFP-E+p35S-??PLDMV-mCheny)与阴性对照组(pGreenII-35S+?pGreenH-35S)?—致,仍未见明显的症状??发生(图9C)。??攻毒60天后

【参考文献】:
期刊论文
[1]番木瓜环斑病毒弱毒株的构建及分析[J]. 付兰兰,庹德财,沈文涛,言普,黎小瑛,周鹏.  热带作物学报. 2016(12)
[2]交叉保护防治柑橘衰退病研究进展[J]. 周彦.  园艺学报. 2014(09)
[3]马铃薯Y病毒属病毒的细胞生物学研究进展[J]. 崔晓艳,魏太云,陈新.  中国农业科学. 2012(07)
[4]我国番木瓜产业发展现状和主要问题[J]. 杨培生,钟思现,杜中军,周鹏,陈业渊.  中国热带农业. 2007(04)
[5]番木瓜的营养保健价值与产品开发[J]. 刘思,沈文涛,黎小瑛,周鹏.  广东农业科学. 2007(02)
[6]RNA沉默技术及其在植物中的应用[J]. 朱剑,余潮,朱友林.  遗传. 2007(01)
[7]马铃薯Y病毒属病毒基因功能研究进展[J]. 李向东,于晓庆,古勤生,刘金亮,竺晓平,郭兴启.  山东科学. 2006(03)
[8]本地早柑桔衰退病毒病的交叉保护研究[J]. 崔伯法,崔圣为,王洪祥,翁法令,龚吉强.  浙江大学学报(农业与生命科学版). 2005(04)
[9]RNA沉默的病毒抑制子[J]. 崔晓峰,周雪平.  生物化学与生物物理进展. 2005(03)
[10]柑桔衰退病毒弱毒株及其筛选方法[J]. 周彦,周常勇.  植物保护. 2004(04)

博士论文
[1]番木瓜畸形花叶病毒检测鉴定及侵染性克隆构建与应用[D]. 庹德财.海南大学 2015
[2]烟草脉带花叶病毒和马铃薯A病毒HC-Pro调控RNA沉默抑制、协生和致病力的机制[D]. 王洁.山东农业大学 2012

硕士论文
[1]大豆花叶病毒半夏株系编码的P1和6K1蛋白与寄主植物蛋白间的互作初步研究[D]. 洪雪玉.浙江大学 2006



本文编号:3246743

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