感染BmNPV家蚕免疫系统相关基因的差异性表达和功能分析
发布时间：2021-07-04 05:29
蛋白质组学是研究生物机体内在变化,以及蛋白质和相关基因功能的重要手段。我们通过这项技术可以了解病原体感染的宿主体内免疫系统调控,代谢通路调节等一些系列机体的应激变化。当宿主被外界病原微生物感染时,其体液免疫和细胞免疫会发生相应的免疫应答反应,主要原因是参与免疫调控的相关蛋白表达量发生了变化。因此,宿主感染病原体后,研究免疫相关蛋白的调控对于探究微生物致病机制和宿主免疫调控机理非常重要。在这些相关蛋白中有些会涉及到宿主作为生物反应器对大型哺乳类动物的过敏性炎症反应中,而有些则是宿主能够有效预防病原微生物的有利手段,但是极个别的蛋白也能够参与到外界病原对宿主的感染过程中,从而提高病原的危害性。本实验应用三种不同的蛋白质组学技术,对家蚕在BmNPV感染后免疫相关蛋白和基因的调控进行了深入研究。1.双向电泳技术优化体系建立本次实验对采用四种不同的纯化以及蛋白提取方法,3种不同聚焦时间,两种考马斯亮蓝染色法和胶条PH值以及平衡时间对家蚕蚕蛹双向电泳结果的影响。实验结果表明,用于TCA-丙酮进行研磨后过夜沉降提取的蛋白效率最高,获得的蛋白点最多,8000v,80000vh时蛋白纵横条带较少,且蛋白...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
家蚕蚕蛹蛋白提取方法
图 A 图 B 图 C 图 D图2.1家蚕蚕蛹蛋白提取方法Fig.2.1 Extraction methodA-丙酮过夜沉降法 图B：TCA-丙酮蛋白纯化试剂图C：研磨样本离心分层去脂法 图D：TCA-丙酮研-acetone over night settlement method Fig.B:TCA-acetone and 2d-knding sample and centrifugation remove the fats Fig.D:TCA-acetone grindPDquest 结果显示， 如图 A 至图 B 的蛋白点依次为 72，108，13部分明显看到大量的横纵条纹，蛋白点不明显且拖尾严重，说明等电聚焦过程中升压过慢，没有完全聚焦。而图 B 中蛋白点少于图程种蛋白有损失。图 C 和图 D 在蛋白点数量差距不大，但图 C 多，不利于后期质谱。综合表明图 D 的方法效率最高。焦时间后的蛋白图谱结果(图 2.2 其他条件相同，胶条 pH:3-10)
2.3 不同考马斯亮蓝染色法后的蛋白图谱结果（图 2.3 其他条件相同，胶条 pH:3-10）图 A 图 B图2.3 不同考马斯亮蓝染色Fig.2.3 Coomassie Blue Staining图A：胶体考马斯亮蓝染色法 图B：传统考马斯亮蓝染色法Fig.A: colloidal Coomassie brilliant blue Fig.B: traditional Coomassie brilliant blue在相同聚焦条件下，图 B 的背景明显优于图 A，而且在横线上半部分横纵条纹相对较少。根据 PDquest，图 A 和图 B 的蛋白点分别为 158 和 117，说明胶体考马斯亮蓝染色法对于蛋白检测灵敏度要高，从而说明不同染色液染色的效果也影响实验图谱的效果。
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕感染质型多角体病毒（BmCPV）后中肠组织差异蛋白质分析[J]. 高坤,邓祥元,裘智勇,覃光星,郭锡杰. 中国农业科学. 2013(13)
[2]鹅肝脏蛋白质提取与双向电泳分离技术研究[J]. 刘忠华,杨晓勤,张军,段修军,王健,董飚,龚道清. 中国家禽. 2011(21)
[3]利用双向电泳技术分离野牛草叶片蛋白的方法研究[J]. 康俊梅,熊军波,孙彦,李燕,沈静,杨青川. 西北农业学报. 2010(02)
[4]蚕蛹的营养成分分析[J]. 王彦平,刘洁,吴予明,刘利娥,吕全军,吴拥军. 郑州大学学报(医学版). 2009(03)
[5]家蚕免疫相关基因和信号途径的鉴定和比较分析(英文)[J]. 程廷才,夏庆友,许平震,谭祥,方婷,向仲怀. 昆虫学报. 2009(03)
[6]家蚕抗BmNPV品系与感性品系血淋巴液蛋白质组的差异分析[J]. 蔡克亚,陈克平,刘晓勇,姚勤,李军. 生物工程学报. 2008(02)
[7]盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验的几点改进[J]. 王琳. 生物学杂志. 2007(06)
[8]Molecular mechanism of TNF signaling and beyond[J]. Zheng-gang LIU* Cell and Cancer Biology Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, NIH, 9000 Rockville Pike Bethesda, MD 20892, USA. Cell Research. 2005(01)
[9]家蚕相关蛋白质研究进展[J]. 赵峰,霍永康,汪延生,林健荣. 广东蚕业. 2004(04)
[10]家蚕蛹虫草的人工培育及其成份分析[J]. 贡成良,吴友良,朱军贞,潘中华,彭国平,楼凤昌. 中国食用菌. 1993(04)
硕士论文
[1]家蚕蚕蛹过敏原蛋白质组学和分子生物学研究[D]. 刘硕.南昌大学 2010
[2]耐辐射球菌基因DR1709突变体的蛋白质组分析[D]. 田双起.郑州大学 2009
[3]蚕蛹蛋白肽的制备及其功能活性研究[D]. 王浩.吉林农业大学 2007
本文编号：3264137
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：112 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
家蚕蚕蛹蛋白提取方法
图 A 图 B 图 C 图 D图2.1家蚕蚕蛹蛋白提取方法Fig.2.1 Extraction methodA-丙酮过夜沉降法 图B：TCA-丙酮蛋白纯化试剂图C：研磨样本离心分层去脂法 图D：TCA-丙酮研-acetone over night settlement method Fig.B:TCA-acetone and 2d-knding sample and centrifugation remove the fats Fig.D:TCA-acetone grindPDquest 结果显示， 如图 A 至图 B 的蛋白点依次为 72，108，13部分明显看到大量的横纵条纹，蛋白点不明显且拖尾严重，说明等电聚焦过程中升压过慢，没有完全聚焦。而图 B 中蛋白点少于图程种蛋白有损失。图 C 和图 D 在蛋白点数量差距不大，但图 C 多，不利于后期质谱。综合表明图 D 的方法效率最高。焦时间后的蛋白图谱结果(图 2.2 其他条件相同，胶条 pH:3-10)
2.3 不同考马斯亮蓝染色法后的蛋白图谱结果（图 2.3 其他条件相同，胶条 pH:3-10）图 A 图 B图2.3 不同考马斯亮蓝染色Fig.2.3 Coomassie Blue Staining图A：胶体考马斯亮蓝染色法 图B：传统考马斯亮蓝染色法Fig.A: colloidal Coomassie brilliant blue Fig.B: traditional Coomassie brilliant blue在相同聚焦条件下，图 B 的背景明显优于图 A，而且在横线上半部分横纵条纹相对较少。根据 PDquest，图 A 和图 B 的蛋白点分别为 158 和 117，说明胶体考马斯亮蓝染色法对于蛋白检测灵敏度要高，从而说明不同染色液染色的效果也影响实验图谱的效果。
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕感染质型多角体病毒（BmCPV）后中肠组织差异蛋白质分析[J]. 高坤,邓祥元,裘智勇,覃光星,郭锡杰. 中国农业科学. 2013(13)
[2]鹅肝脏蛋白质提取与双向电泳分离技术研究[J]. 刘忠华,杨晓勤,张军,段修军,王健,董飚,龚道清. 中国家禽. 2011(21)
[3]利用双向电泳技术分离野牛草叶片蛋白的方法研究[J]. 康俊梅,熊军波,孙彦,李燕,沈静,杨青川. 西北农业学报. 2010(02)
[4]蚕蛹的营养成分分析[J]. 王彦平,刘洁,吴予明,刘利娥,吕全军,吴拥军. 郑州大学学报(医学版). 2009(03)
[5]家蚕免疫相关基因和信号途径的鉴定和比较分析(英文)[J]. 程廷才,夏庆友,许平震,谭祥,方婷,向仲怀. 昆虫学报. 2009(03)
[6]家蚕抗BmNPV品系与感性品系血淋巴液蛋白质组的差异分析[J]. 蔡克亚,陈克平,刘晓勇,姚勤,李军. 生物工程学报. 2008(02)
[7]盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白实验的几点改进[J]. 王琳. 生物学杂志. 2007(06)
[8]Molecular mechanism of TNF signaling and beyond[J]. Zheng-gang LIU* Cell and Cancer Biology Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, NIH, 9000 Rockville Pike Bethesda, MD 20892, USA. Cell Research. 2005(01)
[9]家蚕相关蛋白质研究进展[J]. 赵峰,霍永康,汪延生,林健荣. 广东蚕业. 2004(04)
[10]家蚕蛹虫草的人工培育及其成份分析[J]. 贡成良,吴友良,朱军贞,潘中华,彭国平,楼凤昌. 中国食用菌. 1993(04)
硕士论文
[1]家蚕蚕蛹过敏原蛋白质组学和分子生物学研究[D]. 刘硕.南昌大学 2010
[2]耐辐射球菌基因DR1709突变体的蛋白质组分析[D]. 田双起.郑州大学 2009
[3]蚕蛹蛋白肽的制备及其功能活性研究[D]. 王浩.吉林农业大学 2007
本文编号：3264137
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