棉花角斑病菌由ClpA ATPase介导的逆境胁迫相关基因的功能

发布时间：2021-07-04 07:00

　　由野油菜黄单胞菌锦葵致病变种（Xanthomonascampestrispv.malvacearum,Xcm）侵染引起棉花角斑病在历史上危害较轻,是一种棉花次要病害,棉花角斑病菌的致病机制研究较少。近年来,由于海岛棉品种的推广和气候条件的变化,棉花角斑病危害逐年加重。因此,研究Xcm的致病机制,对于制定高效的防治措施具有重要价值。ClpA是一种保守存在的细菌内蛋白质量控制因子,通过水解ATP来推动细胞内异常蛋白的降解,ClpA在病菌Xcm中的作用尚未见报道。前期研究中,我们证明了 ClpA参与Xcm对于棉花的致病性,但是受ClpA调控的致病因子类型和代谢途径有待阐明。本研究通过敲除Xcm野生型和△clpA突变体的5个差异表达蛋白的编码基因,测定野生型与缺陷型菌株的表型,在此基础上,解析ClpA对于Xcm的调控作用。利用生物信息学方法比对前期蛋白质组学方法测定出Xcm野生型和△clpA突变体的差异表达蛋白的部分氨基酸序列,鉴定出5个差异表达蛋白。它们分别是酮戊二酸半醛脱氢酶（ketoglutarate semialdehyde dehydrogenase,KsdD）,青霉素结合蛋白（pe... 

【文章来源】：河南大学河南省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图３－１．?５个基因编码蛋白质的结构域??Ｆｉｇｕｒｅ３－１．?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｄｏｍａｉｎｓ?ｅｎｃｏｄｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｆｉｖｅ?ｇｅｎｅｓ??

取验证正确的ｐＫ１８－ｆａｃ／Ｄ?ｕｐ－ｄｏｗｎ—ｃｏ／／?ｐｉｒ丨１６质粒２ｊ＿ｉＬ，电击转化至??ｃｏ／／Ｓ１７－１中，涂布Ｋｍ抗性平板。提取板上长出的单菌落的质粒，分别进行ＰＣＲ??扩增验证和酶切验证，得到的结果和预想的结果相符合（如图３－３）。??３．２．４突变株的筛选??（１）

??图３－３？目的基因敲除载体酶切验证结果??Ｆｉｇｕｒｅ３－３．?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｗｏ?ｅｎｚｙｍｅｓ?ｄｉｇｅｓｔ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｖｅｃｔｏｒｓ?ｐｌａｓｍｉｄ??注：Ｍ代表Ｍａｒｋｅｒ，?１代表扩增出的上下游连接片段，２代表双酶切后的敲除载体，３??代表用同样的酶进行双酶切后的ｐＫｌ８载体。Ａ代表敲除载体，Ｂ代表；敲除载体，??Ｃ代表电敲除载体，Ｄ代表／ｐｅｒ敲除载体，Ｅ代表敲除载体。??（２）?电击转化ＣＷＳ１７－１??取验证正确的ｐＫ１８－ｆａｃ／Ｄ?ｕｐ－ｄｏｗｎ—ｃｏ／／?ｐｉｒ丨１６质粒２ｊ＿ｉＬ，电击转化至??ｃｏ／／Ｓ１７－１中，涂布Ｋｍ抗性平板。提取板上长出的单菌落的质粒，分别进行ＰＣＲ??扩增验证和酶切验证，得到的结果和预想的结果相符合（如图３－３）。??３．２．４突变株的筛选??（１）

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国棉花生理病害研究概况[J]. 张战备,段国琪,张一白,张慧杰,张国强,王艳萍,王丹.  山西农业科学. 2015(02)
[2]花生热激蛋白AhHSP70与热激因子AhHSF基因的克隆及表达分析[J]. 李翠,侯蕾,任丽,张烨,郑奕雄,王兴军.  山东农业科学. 2015(04)
[3]细菌群体感应研究进展[J]. 许玉彬,张颖,王淼,王少伟,王刚.  河南农业科学. 2013(12)
[4]如何识别与防治棉花角斑病?[J]. 王迪轩,龙霞.  农药市场信息. 2013(16)
[5]细菌双组分系统的研究进展[J]. 郝艳华,张维,陈明.  中国农业科技导报. 2012(02)
[6]棉花角斑病的发生与防治[J]. 张秀阁.  江西棉花. 2009(05)
[7]棉角斑病对棉花苗、蕾期危害的研究[J]. 张家清,张大业.  云南农业大学学报. 1992(04)
[8]著名植物病理学微生物学家——俞大绂[J]. 颜耀祖.  农业科技通讯. 1989(03)

硕士论文
[1]棉花角斑病菌hpaXm基因敲除与互补载体构建[D]. 王慕瑾.海南大学 2014



本文编号：3264283