抗PVY病毒转NtBT1基因烟草的培育
发布时间：2021-07-07 16:31
烟草在我国是重要的经济作物之一,种植烟草的主要目的是收获叶片,通过工业加工制成各种烟制品,满足消费者需求。因此,烟草种质的差异,直接影响着成品烟制品的品质。与质量好的烟制品相比,质量差的烟制品首先在口感上大打折扣,其次质量差的烟制品中焦油及尼古丁等含量比较多,这会对肺部造成更大的影响。烟草病毒病是全世界烟草栽培区普遍存在的烟草病害之一,烟草病毒病的种类众多,分布也比较广。自20世纪50年代以来,烟草病毒病在世界各地开始发生危害,给烟草生产造成了巨大的影响。马铃薯PVY病毒是马铃薯Y病毒组（potyvirus）中的一种病毒,PVY病毒可侵染多种植物,其中以茄科、藜科和豆科植物受害最重。烟草马铃薯Y病毒病就是由马铃薯Y病毒（PVY）侵染烟草引起的一种系统性病害,该病毒病又称“脉坏死病”、“脉带病”等,感染该病毒的株系一般表现出花叶、坏死和卷叶三种症状。早期感染该病毒会导致烟草绝产绝收,近收获期感染的烟草,会严重影响烤烟品质。为了从植物基因组中发掘更多的抗PVY病毒基因用于植物抗病理论研究与育种应用,前期实验已对烟草感染PVY病毒后的转录组进行了测序与分析,发现了一个受PVY诱导显著上调表达...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＴＡＺ结构域??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?ＴＡＺ?ｄｏｍａｉｎ??
栽培品种“Ｋ３２６”中沉默Ｍ５７７，与对照相比，Ｍ５７７基因沉默烟草对ＰＶＹＮ?（ＰＶＹ叶脉坏??死株系）的抗性明显减弱，表现为发病时间早，症状加重，烟草叶脉不仅坏死区域增大，而??且坏死区域还向叶肉区域延伸，结果如图１－２所示。??龜＿??多??ＮｔＢＴｌ－ＳＨｅｎｃｅｉｌ?Ｍｏｃｋ??图１－２Ｍ５７７基因沉默烟草与对照接种ＰＶＹＮｇ的症状??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＮｔＢＴｌ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｔｏｂａｃｃｏ?ｗｅｒｅ?ｓｉｌｅｎｃｅｄ??同时，为了研究其他植物中的ＢＴ１基因是否具有类似的功能，我们利用烟草脆裂病毒??（Ｔｏｂａｃｃｏ?ｒａｔｔｌｅ?ｖｉｒｕｓ，ＴＲＶ）介导的基因沉默载体，在本氏烟（Ｍｃｏ／—ａ？训（３）中沉??默?７Ｗ５７７?的同源基因?Ｍ？＿Ｓ７７?（Ｍｅ如如?ＢＴＢ?ａｎｄ?ＴＡＺ?ｄｏｍａｉｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?１），得到??相同的结果，即肠５７７基因沉默后本氏烟对ＰＶＹ的抗性明显减弱，表现为花叶和卷曲症状??加重，实验结果如图１－３所示。??５??
２．１．１菌株与质粒??实验所用农杆菌菌株为ＥＨＡ１０５，?Ｍ５７７基因对烟草的遗传转化的载体图谱为ｐＢＨＴ－００５??（图２－１），表达载体构建图谱为ｐＢＨＴ－ＢＴｌ?（图２－２）．??Ｔｎｏｓ?Ｐ３５Ｓ??ＮｔＢＴ１??丨，Ｂ?爹一。ＢＨＴ－ＢＴｌ?「‘Ｗ??１?１４０００?ｂｐ?Ｔｎｏｓ??ＮＰＴ?ＩＩ?／??图２－１载体ｐＢＨＴ－００５图谱?图２－２?ｐＢＨＴ－ＢＴｌ载体构建??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｍａｐ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＢＨＴ－００５?Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｍａｐ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＢＨＴ－ＢＴｌ??２．１．２植物与病毒材料??实验材料为烟草（７ＷＣ〇汾，品种为烟草Ｋ３２６，由贵州烟草研宄所提供；马??铃薯Ｙ病毒脉坏死株系（ＰＹＶＮ）均由贵州省烟草科学研究院保存。??２．１．３培养基??ＬＢ培养基和ＹＥＢ培养基分别用于培养大肠杆菌和农杆菌，具体配方由本实验室提供；??发芽培养基：１／８?ＭＳ，ｐＨ?５．８，?０．８％琼脂；??分化培养基（用于预培养和共培养）？．?ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ，?ｐＨ５．８，?０．７５％??琼脂；??筛选培养基：分化培养基＋Ｋｍ＋羧苄青霉素钠；??生根培养基：１／２?ＭＳ，?ｐＨ?５．８，?０．７％琼脂；??ＭＳ?盐采购于?ＰｈｙｔｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ?Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ?公司。??８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]从转基因技术角度谈转基因植物的安全性[J]. 叶兴国,杜丽璞. 中国种业. 2016(09)
[2]生物防治在我国烟草病虫害防治上的应用[J]. 林兵. 湖南农机. 2014(12)
[3]植物病毒病害与化学防治[J]. 陈亮,刘君丽. 农药. 2013(11)
[4]抗病毒转基因烟草研究进展[J]. 赵文军,冯瑜,杨继周,田育天,徐益群. 云南农业大学学报(自然科学). 2013(05)
[5]烟草花叶病毒病发生及防治研究进展[J]. 周建国,肖启明,刘双清,周志成,唐前君. 安徽农业科学. 2013(01)
[6]烤烟漂浮育苗中烟草普通花叶病毒病的传播规律[J]. 张崑,胡宁贵,朱峻,刘学辉,张海,范成平,左锐. 贵州农业科学. 2012(12)
[7]贵州烟草蚜传病毒病（PVY、CMV）发生规律及其预测模型的初步研究[J]. 商胜华,孟建玉,罗玉英,罗会斌,徐语,李忠俊. 植物保护. 2012(05)
[8]抗旱相关基因在烟草中的应用研究进展[J]. 赵文军,杨继周,胡保文,常剑. 生物技术进展. 2012(04)
[9]中国烟草品种资源的研究现状与展望[J]. 蔡长春,冯吉,周永碧. 湖北农业科学. 2012(13)
[10]我国烟草病毒病的发生及综合防治研究进展[J]. 彭曙光. 江西农业学报. 2011(01)
硕士论文
[1]水稻转录因子BTB/TAZ抗病功能的RNAi分析[D]. 付月灵.中国农业科学院 2010
[2]渗透胁迫相关基因对烟草的遗传转化及基因功能的研究[D]. 齐岩.东北农业大学 2005
本文编号：3269974
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１?ＴＡＺ结构域??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?ＴＡＺ?ｄｏｍａｉｎ??
栽培品种“Ｋ３２６”中沉默Ｍ５７７，与对照相比，Ｍ５７７基因沉默烟草对ＰＶＹＮ?（ＰＶＹ叶脉坏??死株系）的抗性明显减弱，表现为发病时间早，症状加重，烟草叶脉不仅坏死区域增大，而??且坏死区域还向叶肉区域延伸，结果如图１－２所示。??龜＿??多??ＮｔＢＴｌ－ＳＨｅｎｃｅｉｌ?Ｍｏｃｋ??图１－２Ｍ５７７基因沉默烟草与对照接种ＰＶＹＮｇ的症状??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＮｔＢＴｌ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｔｏｂａｃｃｏ?ｗｅｒｅ?ｓｉｌｅｎｃｅｄ??同时，为了研究其他植物中的ＢＴ１基因是否具有类似的功能，我们利用烟草脆裂病毒??（Ｔｏｂａｃｃｏ?ｒａｔｔｌｅ?ｖｉｒｕｓ，ＴＲＶ）介导的基因沉默载体，在本氏烟（Ｍｃｏ／—ａ？训（３）中沉??默?７Ｗ５７７?的同源基因?Ｍ？＿Ｓ７７?（Ｍｅ如如?ＢＴＢ?ａｎｄ?ＴＡＺ?ｄｏｍａｉｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?１），得到??相同的结果，即肠５７７基因沉默后本氏烟对ＰＶＹ的抗性明显减弱，表现为花叶和卷曲症状??加重，实验结果如图１－３所示。??５??
２．１．１菌株与质粒??实验所用农杆菌菌株为ＥＨＡ１０５，?Ｍ５７７基因对烟草的遗传转化的载体图谱为ｐＢＨＴ－００５??（图２－１），表达载体构建图谱为ｐＢＨＴ－ＢＴｌ?（图２－２）．??Ｔｎｏｓ?Ｐ３５Ｓ??ＮｔＢＴ１??丨，Ｂ?爹一。ＢＨＴ－ＢＴｌ?「‘Ｗ??１?１４０００?ｂｐ?Ｔｎｏｓ??ＮＰＴ?ＩＩ?／??图２－１载体ｐＢＨＴ－００５图谱?图２－２?ｐＢＨＴ－ＢＴｌ载体构建??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｍａｐ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＢＨＴ－００５?Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｍａｐ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＢＨＴ－ＢＴｌ??２．１．２植物与病毒材料??实验材料为烟草（７ＷＣ〇汾，品种为烟草Ｋ３２６，由贵州烟草研宄所提供；马??铃薯Ｙ病毒脉坏死株系（ＰＹＶＮ）均由贵州省烟草科学研究院保存。??２．１．３培养基??ＬＢ培养基和ＹＥＢ培养基分别用于培养大肠杆菌和农杆菌，具体配方由本实验室提供；??发芽培养基：１／８?ＭＳ，ｐＨ?５．８，?０．８％琼脂；??分化培养基（用于预培养和共培养）？．?ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ，?ｐＨ５．８，?０．７５％??琼脂；??筛选培养基：分化培养基＋Ｋｍ＋羧苄青霉素钠；??生根培养基：１／２?ＭＳ，?ｐＨ?５．８，?０．７％琼脂；??ＭＳ?盐采购于?ＰｈｙｔｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ?Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ?公司。??８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]从转基因技术角度谈转基因植物的安全性[J]. 叶兴国,杜丽璞. 中国种业. 2016(09)
[2]生物防治在我国烟草病虫害防治上的应用[J]. 林兵. 湖南农机. 2014(12)
[3]植物病毒病害与化学防治[J]. 陈亮,刘君丽. 农药. 2013(11)
[4]抗病毒转基因烟草研究进展[J]. 赵文军,冯瑜,杨继周,田育天,徐益群. 云南农业大学学报(自然科学). 2013(05)
[5]烟草花叶病毒病发生及防治研究进展[J]. 周建国,肖启明,刘双清,周志成,唐前君. 安徽农业科学. 2013(01)
[6]烤烟漂浮育苗中烟草普通花叶病毒病的传播规律[J]. 张崑,胡宁贵,朱峻,刘学辉,张海,范成平,左锐. 贵州农业科学. 2012(12)
[7]贵州烟草蚜传病毒病（PVY、CMV）发生规律及其预测模型的初步研究[J]. 商胜华,孟建玉,罗玉英,罗会斌,徐语,李忠俊. 植物保护. 2012(05)
[8]抗旱相关基因在烟草中的应用研究进展[J]. 赵文军,杨继周,胡保文,常剑. 生物技术进展. 2012(04)
[9]中国烟草品种资源的研究现状与展望[J]. 蔡长春,冯吉,周永碧. 湖北农业科学. 2012(13)
[10]我国烟草病毒病的发生及综合防治研究进展[J]. 彭曙光. 江西农业学报. 2011(01)
硕士论文
[1]水稻转录因子BTB/TAZ抗病功能的RNAi分析[D]. 付月灵.中国农业科学院 2010
[2]渗透胁迫相关基因对烟草的遗传转化及基因功能的研究[D]. 齐岩.东北农业大学 2005
本文编号：3269974
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