大麦条纹花叶病毒γb蛋白在病毒复制和运动中的新功能解析
发布时间：2021-07-08 12:23
病毒的基因组相对较小,蛋白编码能力有限,而病毒的侵染、复制、移动、致病等过程均需要一种或者几种病毒蛋白的直接参与。在寄主与病毒长期地共进化过程中,病毒蛋白逐渐进化出同时具有多种功能的特性,并参与病毒侵染循环的不同过程。大麦条纹花叶病毒（Barley stripe mosaic virus,BSMV）是一种ss（+）RNA病毒,基因组由α、β和γ3条RNA链组成。RNAα编码的αa蛋白具有解旋酶（HEL）和甲基转移酶（MET）结构域,是病毒的复制酶大亚基;RNAβ编码病毒的外壳蛋白CP和病毒的运动相关蛋白TGBs,RNAy编码的γa具有保守的GDD基序,是病毒的复制酶小亚基。γb是一个分子量为17 kDa的富含半胱氨酸的蛋白,具有致病决定因子、种传相关因子、本生烟上的系统运动决定因子和基因沉默抑制子等多种功能,但其与BSMV其它蛋白间的相互作用并协同调控病毒的复制和运动的研究尚未见报道。前人的研究表明,在BSMV侵染的条件下γb蛋白主要定位于细胞质中,部份能特异性的定位于叶绿体上,但是关于其叶绿体定位的生物学功能却是未知的。为此,利用瞬时表达、Pumilio为基础的ssRNA可视化定位系...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：179 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－５?ＣａＭＶ的Ｐ６蛋白结构域示意图（Ｓｃｈｏｅｌｚ?ｅｔ?ａｌ．，２０１６）??图屮Ｄ丨到Ｄ４指丨＞６负贵自身互作的区域：ｍｉｎｉ?ＴＡＶ是指Ｐ６激活翻译所需要的最小的区域；两个ＮＬＳ．?Ｎｕｃｌｅａｒ??
帮助病毒更好的建立侵染（ＸｉｏｎｇａｎｄＷａｎｇ．２０１３）。??马铃薯Ｙ病毒属病毒编码的ＣＰ蛋白大小不等．约为２８－４０?ｋＤａ，其大致可以被分成．．个区域，??Ｎ端和Ｃ端ｎｊ＇变区和中间较保守的核心区，Ｎ端和Ｃ端可变区暴露在病毒粒子的表面．并且Ｎ端??包含有主要的病毒特异性的农位（ＳｈｕｋｌａａｎｄＷａｒｄ．丨９８９）。ＣＰ的蛋白结构详细见图丨－１０所示。??ＤＡＧ?Ｒ?Ｄ??ｃｐ?ｉ１????Ｃｏｒｅ????Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ?Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ??图１－１０马铃薯Ｙ病毒属病毒编码的ＣＰ蛋白的结构示意图（ＩＪ丨ｃｕｑｕｉ－Ｉｎｃｈｉｍａｅｔａｌ．．?２００１）??图屮．４蚜虫传播相关的保分基序ｄａｇ?ｆｌｒ两个保‘、：ｒ的氨躲酸都已标出，ｎ端及ｃ端的可变Ｋ＊堝充颜色．而屮间??的核心区用波浪形线条填充；??马铃薯Ｙ病毒属病毒编码的ＣＰ蛋丨＇丨主要的功能涉及到蚜虫传播、病毒的胞间运动、病毒的??系统运动、病毒基因组ＲＮＡ的包装及病毒基因组ＲＮＡ复制的调节等方面（Ｓｈｕｋｌａ?ａｎｄ?Ｗａｒｄ，?１９８９）－??很早以前，对能进丨＋ｙ？蚜虫传播的病毒分离物和不能进行蚜虫传播的病毒分离物的ｃｐ蛋ｎ进行序??列分析，发现其Ｎ末端的高度保守的ＤＡＧ基序很重要，此：？：氨基酸基序对于该病毒是否能被蚜??虫传播起着决定性的作用（Ｈａｒｒｉｓｏｎ?ａｎｄ?Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，?１９８８）？随着分子生物学技术进步，进一步对ＣＰ??蛋白的；氨基酸基序进行突变分析，再次确定这－结果（Ａｔｒｅｙａ?ｅｔ?ａｌ．，１９９１；?Ａｔｒｅｙａ?ｅｔ?ａｌ．，１９９５：??Ｇａｌｏｎ?ｅｔ?ａｌ＂?１９９２；?Ｌｃｊｐｅｚ－Ｍ
中国农业大学博士学位论文?第三章多功能蛋０Ｙｂ在ＢＳＭＶ的复制中的新功能解析??箭头指示Ｓ标蛋０条带：图３－１１Ｄ图指接种不同的病毒突变体后３天，于ＣＬＳＭ下观察的的结果；ｈ．下两排分??别指注射不同浓度（０Ｄ６ＴＯ）的农杆菌的处理，图片顶端字符代表接种的病毒突变体名称；??３．５．２?ＢＳＭＶ?ｙｂ抑制子活性基本完全丧失的病毒突变体仍能进行较强的复制??为了明确诈的基因沉默抑制活性在病毒的复制中发挥的作用，希望能找到相应的Ｙｂ蛋白的??突变体，这种突变体一方面要求是其抑制子活性完全或大部分丧失，另一方面还能与病毒的复制??酶ａａ发生互作。通过阅读早期关于Ｙｂ的文献，发现了两个突变体ＹｂＭ２７＆?ＹｂＮｅ，这两个突变体??抑制子活性基本完全丧失（ＢｒａｇｇａｎｄＪａｃｋｓｏｎ，２００４），原因是突变体Ｙｂｉｍ蛋白的Ｃ端不能进行同??源互作，而ＹｂＮＣ则是蛋白上的六个点突变导致蛋白的构象发生了改变。为了寻找相应的抑制子活??性基本丧失的点突变，以ＹｂＮＣ上的六个点突变为基础，分别构建了?Ｙｂｌｌ３〇Ｇ、ｙｂＭ５?（Ｉ１０２Ｇ，?Ｌ１０５Ｇ，??Ｍ１０９Ｇ，?Ｌ１１２Ｇ?和?Ｍ１２０Ｇ）及?ｙｂＭ７?（Ｉ１０２Ｇ，?Ｌ１０５Ｇ，?Ｍ１０９Ｇ，?Ｌ１１２Ｇ，?Ｍ１２０Ｇ，?Ｖ１２７Ｇ?和?Ｉ１３０Ｇ）突??变体（如图３－１２Ａ），然后测试其相应的抑制子活性。??Ａ?Ｂ?ｓＧＦＰ???ｐｇｄ?ＱＨ３＞—０???ｆ?￥??ｐＧＤ－ｓＧＦＰ?Ｉ?３５Ｓ?ｓＧＦＰ?ｈｍ?????Ｊｒ?ａｎｔｉ?ＧＦｐ??ｐｃＤ－ｙｂ?ｒ＾￣Ｖｊ?ｖｂ?ｉ－ｍ?＿＿＿＿＿＿＿＿＿??ＰＧＤ－Ｙｂ丨ｕＧ
【参考文献】：
期刊论文
[1]大麦条纹花叶病毒中国株基因组RNA1的全长序列分析[J]. 孙现超,邱并生. 中国农业科学. 2008(07)
[2]大麦条纹花叶病毒北京分离物的鉴定[J]. 孙现超,安德荣,青玲,杨水英. 西南大学学报(自然科学版). 2007(10)
[3]大麦条纹花叶病毒新疆分离物是三组分RNA病毒[J]. 彭学贤,蔡发兴,孙薇,莽克强. 病毒学报. 1986(03)
[4]新疆大麦条纹花叶病毒的研究——Ⅰ.病毒株系类型的鉴定及核酸的体外翻译[J]. 彭学贤,蔡文启,赵淑珍,莽克强. 病毒学报. 1985(02)
[5]大、小麦条纹花叶病毒病的研究[J]. 张月季. 浙江农业科学. 1984(02)
[6]大麦条纹花叶病毒的研究[J]. 王志民,李维琪,赵民安,冯贡泽,尼莎,秦伟,李国英,谢浩. 微生物学报. 1981(04)
[7]大麦条纹花叶病毒（BSMV）在新疆的发生[J]. 谢浩,王志民,李维琪,尼沙. 植物病理学报. 1981(01)
[8]新疆春麦种子带大麦条纹花叶病毒调查[J]. 李国英,汪国发. 新疆农业科学. 1981(06)
[9]种传大小麦病毒病的研究（Ⅰ）——大麦条纹花叶病毒在我国的证实[J]. 于善谦,王鸣岐,陈仲宜,张若平. 复旦学报(自然科学版). 1980(04)
[10]新疆小麦上分离到大麦条纹花叶病毒[J]. 谢浩,王志民,李维琪,尼沙,李国英,余俊杰. 微生物学报. 1980(03)
本文编号：3271561
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：179 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１－５?ＣａＭＶ的Ｐ６蛋白结构域示意图（Ｓｃｈｏｅｌｚ?ｅｔ?ａｌ．，２０１６）??图屮Ｄ丨到Ｄ４指丨＞６负贵自身互作的区域：ｍｉｎｉ?ＴＡＶ是指Ｐ６激活翻译所需要的最小的区域；两个ＮＬＳ．?Ｎｕｃｌｅａｒ??
帮助病毒更好的建立侵染（ＸｉｏｎｇａｎｄＷａｎｇ．２０１３）。??马铃薯Ｙ病毒属病毒编码的ＣＰ蛋白大小不等．约为２８－４０?ｋＤａ，其大致可以被分成．．个区域，??Ｎ端和Ｃ端ｎｊ＇变区和中间较保守的核心区，Ｎ端和Ｃ端可变区暴露在病毒粒子的表面．并且Ｎ端??包含有主要的病毒特异性的农位（ＳｈｕｋｌａａｎｄＷａｒｄ．丨９８９）。ＣＰ的蛋白结构详细见图丨－１０所示。??ＤＡＧ?Ｒ?Ｄ??ｃｐ?ｉ１????Ｃｏｒｅ????Ｎ－ｔｅｒｍｉｎａｌ?Ｃ－ｔｅｒｍｉｎａｌ??图１－１０马铃薯Ｙ病毒属病毒编码的ＣＰ蛋白的结构示意图（ＩＪ丨ｃｕｑｕｉ－Ｉｎｃｈｉｍａｅｔａｌ．．?２００１）??图屮．４蚜虫传播相关的保分基序ｄａｇ?ｆｌｒ两个保‘、：ｒ的氨躲酸都已标出，ｎ端及ｃ端的可变Ｋ＊堝充颜色．而屮间??的核心区用波浪形线条填充；??马铃薯Ｙ病毒属病毒编码的ＣＰ蛋丨＇丨主要的功能涉及到蚜虫传播、病毒的胞间运动、病毒的??系统运动、病毒基因组ＲＮＡ的包装及病毒基因组ＲＮＡ复制的调节等方面（Ｓｈｕｋｌａ?ａｎｄ?Ｗａｒｄ，?１９８９）－??很早以前，对能进丨＋ｙ？蚜虫传播的病毒分离物和不能进行蚜虫传播的病毒分离物的ｃｐ蛋ｎ进行序??列分析，发现其Ｎ末端的高度保守的ＤＡＧ基序很重要，此：？：氨基酸基序对于该病毒是否能被蚜??虫传播起着决定性的作用（Ｈａｒｒｉｓｏｎ?ａｎｄ?Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，?１９８８）？随着分子生物学技术进步，进一步对ＣＰ??蛋白的；氨基酸基序进行突变分析，再次确定这－结果（Ａｔｒｅｙａ?ｅｔ?ａｌ．，１９９１；?Ａｔｒｅｙａ?ｅｔ?ａｌ．，１９９５：??Ｇａｌｏｎ?ｅｔ?ａｌ＂?１９９２；?Ｌｃｊｐｅｚ－Ｍ
中国农业大学博士学位论文?第三章多功能蛋０Ｙｂ在ＢＳＭＶ的复制中的新功能解析??箭头指示Ｓ标蛋０条带：图３－１１Ｄ图指接种不同的病毒突变体后３天，于ＣＬＳＭ下观察的的结果；ｈ．下两排分??别指注射不同浓度（０Ｄ６ＴＯ）的农杆菌的处理，图片顶端字符代表接种的病毒突变体名称；??３．５．２?ＢＳＭＶ?ｙｂ抑制子活性基本完全丧失的病毒突变体仍能进行较强的复制??为了明确诈的基因沉默抑制活性在病毒的复制中发挥的作用，希望能找到相应的Ｙｂ蛋白的??突变体，这种突变体一方面要求是其抑制子活性完全或大部分丧失，另一方面还能与病毒的复制??酶ａａ发生互作。通过阅读早期关于Ｙｂ的文献，发现了两个突变体ＹｂＭ２７＆?ＹｂＮｅ，这两个突变体??抑制子活性基本完全丧失（ＢｒａｇｇａｎｄＪａｃｋｓｏｎ，２００４），原因是突变体Ｙｂｉｍ蛋白的Ｃ端不能进行同??源互作，而ＹｂＮＣ则是蛋白上的六个点突变导致蛋白的构象发生了改变。为了寻找相应的抑制子活??性基本丧失的点突变，以ＹｂＮＣ上的六个点突变为基础，分别构建了?Ｙｂｌｌ３〇Ｇ、ｙｂＭ５?（Ｉ１０２Ｇ，?Ｌ１０５Ｇ，??Ｍ１０９Ｇ，?Ｌ１１２Ｇ?和?Ｍ１２０Ｇ）及?ｙｂＭ７?（Ｉ１０２Ｇ，?Ｌ１０５Ｇ，?Ｍ１０９Ｇ，?Ｌ１１２Ｇ，?Ｍ１２０Ｇ，?Ｖ１２７Ｇ?和?Ｉ１３０Ｇ）突??变体（如图３－１２Ａ），然后测试其相应的抑制子活性。??Ａ?Ｂ?ｓＧＦＰ???ｐｇｄ?ＱＨ３＞—０???ｆ?￥??ｐＧＤ－ｓＧＦＰ?Ｉ?３５Ｓ?ｓＧＦＰ?ｈｍ?????Ｊｒ?ａｎｔｉ?ＧＦｐ??ｐｃＤ－ｙｂ?ｒ＾￣Ｖｊ?ｖｂ?ｉ－ｍ?＿＿＿＿＿＿＿＿＿??ＰＧＤ－Ｙｂ丨ｕＧ
【参考文献】：
期刊论文
[1]大麦条纹花叶病毒中国株基因组RNA1的全长序列分析[J]. 孙现超,邱并生. 中国农业科学. 2008(07)
[2]大麦条纹花叶病毒北京分离物的鉴定[J]. 孙现超,安德荣,青玲,杨水英. 西南大学学报(自然科学版). 2007(10)
[3]大麦条纹花叶病毒新疆分离物是三组分RNA病毒[J]. 彭学贤,蔡发兴,孙薇,莽克强. 病毒学报. 1986(03)
[4]新疆大麦条纹花叶病毒的研究——Ⅰ.病毒株系类型的鉴定及核酸的体外翻译[J]. 彭学贤,蔡文启,赵淑珍,莽克强. 病毒学报. 1985(02)
[5]大、小麦条纹花叶病毒病的研究[J]. 张月季. 浙江农业科学. 1984(02)
[6]大麦条纹花叶病毒的研究[J]. 王志民,李维琪,赵民安,冯贡泽,尼莎,秦伟,李国英,谢浩. 微生物学报. 1981(04)
[7]大麦条纹花叶病毒（BSMV）在新疆的发生[J]. 谢浩,王志民,李维琪,尼沙. 植物病理学报. 1981(01)
[8]新疆春麦种子带大麦条纹花叶病毒调查[J]. 李国英,汪国发. 新疆农业科学. 1981(06)
[9]种传大小麦病毒病的研究（Ⅰ）——大麦条纹花叶病毒在我国的证实[J]. 于善谦,王鸣岐,陈仲宜,张若平. 复旦学报(自然科学版). 1980(04)
[10]新疆小麦上分离到大麦条纹花叶病毒[J]. 谢浩,王志民,李维琪,尼沙,李国英,余俊杰. 微生物学报. 1980(03)
本文编号：3271561
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