蝗绿僵菌同源异型盒基因MaH1的克隆及功能研究
发布时间：2021-07-10 05:50
昆虫病原真菌主要以孢子作为侵染单元感染昆虫,产孢量和孢子质量是其作为生物农药在生产应用上的重要参数。丝状真菌一般有两种产孢方式:由菌丝在顶端或侧面分化形成分生孢子的正常产孢方式;在抗逆境条件下,跨过菌丝阶段直接形成分生孢子的微循环产孢方式。在丝状真菌中对正常产孢研究的相对要深入,而对微循环产孢研究尚少。蝗绿僵菌（Metarhizium acridum）能够被诱导微循环产孢,并且产生的分生孢子具有数量多、产孢速度快、孢子大小均一、抗逆性强等。因此,研究微循环产孢的调控机制可为改良杀虫真菌提供理论依据和新的技术途径。本研究发现蝗绿僵菌同源异型盒基因MaH1的cDNA全长1863bp,编码620个氨基酸,并通过生物信息学分析发现其具有同源异型盒典型的180bp的保守结构域和“Helix-Turn-Helix”结构;通过表达模式分析发现MaH1在产孢时期表达量最高。该研究通过构建同源异型盒基因（MaH1）缺失菌株及回复菌株,研究了MaH1在蝗绿僵菌中的功能,结果表明相对于野生型与回复菌株,发现MaH1缺失后蝗绿僵菌孢子萌发中时提前1.5h;在正常培养条件下,蝗绿僵菌中同源盒基因MaH1缺失后产...
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MaH1的生物信息学分析及基因结构图
图 2.2 MaH1 蛋白与其他同源盒蛋白之间的系统发育进化树构建与保守结构域序列比对（A）MaH1 系统发育树;（B）不同物种间 MaH1 蛋白同源比对及保守结构域预测，MaH1 蛋白有典型的保守结构域：螺旋-转角-螺旋；（C）通过 SMART 软件预测蝗绿僵菌中的同源异型盒基因的二级结构模式图。Fig. 2.2 Phylogenetic analysis and homeodomain sequence of MaH1 according to amino acidsequence aligment.(A) Phylogenetic analysis of MaH1 with MEGA 4.0. Ⅰrepresentative typeⅠ: the homeodomainlocate in N-terminal, Ⅱrepresentative typeⅡ: contain special construction except homeodomain，Ⅲrepresentative typeⅢ：the homeodomain locate in C-terminal. The homeobox of Saccharomycescerevisiae：MATα1(NP_009867.1), MATα2(NP_009866.1), Yox1p(NP_013685.1)，Yhp1p(NP_010739.3)，Tos8p(NP_011419.1), PHO2p(NP_010177.1)，PHO4p(NP_116692.1)；Thehomeobox of Magnaporthe oryzae: HTF1(XP_003718936.1), HTF2(XP_003714728.1),HTF3(XP_003712331.1), HTF4(XP_003717301.1), HTF5(XP_003711331.1),HTF6(XP_003710061.1), PTH12(XP_003717306.1); The homeobox of setosphaeria turcica:
重庆大学硕士学位论文2.3.2 MaH1 敲除和回复载体的构建利用同源重组的原理，设计引物MaH1-LF/LR，MaH1-RF/RR扩增MaH1 的左右臂片段，并成功构建PK2-PB-MaH1/LR载体，将蝗绿僵菌中的MaH1 的2044bp全长序列替换为筛选标记Bar基因，完成敲除载体的构建（Fig.2.3 A）。同时，克隆MaH1的全长序列，利用Sur作为筛选标记，完成回复载体的构建（Fig.2.3 A），并设计合适的酶切位点，利用StuI，BamHI两种酶将大量提取的转化子基因组分别进行酶切，经过southern blot实验验证敲除和回复转化子，结果显示WT菌株基因组中中检测得到一条2100 bp的条带，在敲除突变体中，由于Bar基因成功替代掉了MaHI序列，所以得到的是1030 bp的条带，而回复突变体由于是转化到ΔMaH1菌株中的，所以检测到如图所示的2100bp和1030 bp两条带（Fig.2.3 B），由此可说明获得的敲除和回复转化子都是正确的。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国的蝗灾及防控对策[J]. 任炳忠,张雪. 吉林农业大学学报. 2013(02)
[2]20世纪以来中国蝗虫监测预测研究动态进展[J]. 白月明,刘玲,乐章燕,王培娟,高素华. 中国农学通报. 2012(26)
[3]国内外蝗害治理技术现状与展望[J]. 张龙. 应用昆虫学报. 2011(04)
[4]绿僵菌侵染光肩星天牛幼虫过程的透射电镜观察[J]. 王达,袁芳芳,黄大庄,刘春延,毕华明. 林业科学. 2010(05)
[5]蝗虫微孢子虫与绿僵菌协调使用对东亚飞蝗的毒力测定[J]. 丁晓宇,张龙. 北京农学院学报. 2009(01)
[6]贵港市近年蝗虫发生及治理对策初探[J]. 廖伟萍,谭春凤,徐文强,梁华源. 广西农学报. 2008(04)
[7]蝗虫天敌昆虫研究概述[J]. 胡奇,张龙. 中国植保导刊. 2007(04)
[8]微孢子虫防治农业害虫研究进展[J]. 温发园,张永安,王玉珠,尹新明. 植物保护. 2005(03)
[9]白僵菌分生孢子深层培养及其对马尾松毛虫的毒力[J]. 宋漳. 应用与环境生物学报. 2005(01)
[10]中国蝗灾历史和治蝗观[J]. 游修龄. 华南农业大学学报(社会科学版). 2003(02)
硕士论文
[1]禾谷镰刀菌中Homeobox基因的功能分析[D]. 郑文辉.福建农林大学 2010
本文编号：3275315
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MaH1的生物信息学分析及基因结构图
图 2.2 MaH1 蛋白与其他同源盒蛋白之间的系统发育进化树构建与保守结构域序列比对（A）MaH1 系统发育树;（B）不同物种间 MaH1 蛋白同源比对及保守结构域预测，MaH1 蛋白有典型的保守结构域：螺旋-转角-螺旋；（C）通过 SMART 软件预测蝗绿僵菌中的同源异型盒基因的二级结构模式图。Fig. 2.2 Phylogenetic analysis and homeodomain sequence of MaH1 according to amino acidsequence aligment.(A) Phylogenetic analysis of MaH1 with MEGA 4.0. Ⅰrepresentative typeⅠ: the homeodomainlocate in N-terminal, Ⅱrepresentative typeⅡ: contain special construction except homeodomain，Ⅲrepresentative typeⅢ：the homeodomain locate in C-terminal. The homeobox of Saccharomycescerevisiae：MATα1(NP_009867.1), MATα2(NP_009866.1), Yox1p(NP_013685.1)，Yhp1p(NP_010739.3)，Tos8p(NP_011419.1), PHO2p(NP_010177.1)，PHO4p(NP_116692.1)；Thehomeobox of Magnaporthe oryzae: HTF1(XP_003718936.1), HTF2(XP_003714728.1),HTF3(XP_003712331.1), HTF4(XP_003717301.1), HTF5(XP_003711331.1),HTF6(XP_003710061.1), PTH12(XP_003717306.1); The homeobox of setosphaeria turcica:
重庆大学硕士学位论文2.3.2 MaH1 敲除和回复载体的构建利用同源重组的原理，设计引物MaH1-LF/LR，MaH1-RF/RR扩增MaH1 的左右臂片段，并成功构建PK2-PB-MaH1/LR载体，将蝗绿僵菌中的MaH1 的2044bp全长序列替换为筛选标记Bar基因，完成敲除载体的构建（Fig.2.3 A）。同时，克隆MaH1的全长序列，利用Sur作为筛选标记，完成回复载体的构建（Fig.2.3 A），并设计合适的酶切位点，利用StuI，BamHI两种酶将大量提取的转化子基因组分别进行酶切，经过southern blot实验验证敲除和回复转化子，结果显示WT菌株基因组中中检测得到一条2100 bp的条带，在敲除突变体中，由于Bar基因成功替代掉了MaHI序列，所以得到的是1030 bp的条带，而回复突变体由于是转化到ΔMaH1菌株中的，所以检测到如图所示的2100bp和1030 bp两条带（Fig.2.3 B），由此可说明获得的敲除和回复转化子都是正确的。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国的蝗灾及防控对策[J]. 任炳忠,张雪. 吉林农业大学学报. 2013(02)
[2]20世纪以来中国蝗虫监测预测研究动态进展[J]. 白月明,刘玲,乐章燕,王培娟,高素华. 中国农学通报. 2012(26)
[3]国内外蝗害治理技术现状与展望[J]. 张龙. 应用昆虫学报. 2011(04)
[4]绿僵菌侵染光肩星天牛幼虫过程的透射电镜观察[J]. 王达,袁芳芳,黄大庄,刘春延,毕华明. 林业科学. 2010(05)
[5]蝗虫微孢子虫与绿僵菌协调使用对东亚飞蝗的毒力测定[J]. 丁晓宇,张龙. 北京农学院学报. 2009(01)
[6]贵港市近年蝗虫发生及治理对策初探[J]. 廖伟萍,谭春凤,徐文强,梁华源. 广西农学报. 2008(04)
[7]蝗虫天敌昆虫研究概述[J]. 胡奇,张龙. 中国植保导刊. 2007(04)
[8]微孢子虫防治农业害虫研究进展[J]. 温发园,张永安,王玉珠,尹新明. 植物保护. 2005(03)
[9]白僵菌分生孢子深层培养及其对马尾松毛虫的毒力[J]. 宋漳. 应用与环境生物学报. 2005(01)
[10]中国蝗灾历史和治蝗观[J]. 游修龄. 华南农业大学学报(社会科学版). 2003(02)
硕士论文
[1]禾谷镰刀菌中Homeobox基因的功能分析[D]. 郑文辉.福建农林大学 2010
本文编号：3275315
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3275315.html
最近更新
教材专著
