板栗黄化皱缩病的病原菌鉴定及其防治
发布时间：2021-07-11 08:40
近年来,在冀东和冀北板栗主产区发生了一种俗称“板栗小叶病”的病害,可导致板栗大量减产,且传播速度快,严重威胁着板栗产业的健康发展。本研究试图明确“板栗小叶病”病原菌及分类地位,探索一套有效的综合防控技术。通过巢式PCR扩增、克隆、测序后进行Blastn序列比对分析,所获得的植原体16S r DNA序列与北京怀柔区板栗植原体Candidatus Phytoplasma castaneae CnYC（EU599362）和韩国板栗植原体Ca.P.castaneae（AB054986）的相似度分别为99.44%和99.60%。利用透射电子显微镜观察发现圆形或近圆形植原体存在于枝和叶的细胞中,大小为0.1-0.7μm。结合形态学鉴定和分子生物学鉴定显示:“板栗小叶病”病原菌为Ca.P.castaneae,冀东和冀北地区发生的“板栗小叶病”为板栗黄化皱缩病（Chinese chestnut Yellow Crinkle,CnYC）。基于16S r DNA序列的虚拟RFLP分析表明“板栗小叶病”病原菌Ca.P.castaneae属于16Sr XIX-A亚组,菌株编号为CnYC-Hebei。利用植原体...
【文章来源】：河北科技师范学院河北省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
“板栗小叶病”各时期症状A发病植株B健康植株Fig.2-1Symptomsof"Smallleafofchestnut"AisthediseasedplantandBisthehealthyplant成熟期A1A2B1B2
将所提取DNA浓度统一稀释到100μg/mL作为模板，利用特异性引物R16mF2/R16mR1进行第一轮PCR扩增，以第一轮产物稀释20倍后作为巢式PCR扩增的模板，用R16F2n/R16R2进行巢式PCR，通过1%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物特异性，得到约1.2kb的扩增片段，与预期片段大小相符（图2-3）。而阴性对照未扩增出特异性片段。所得PCR产物送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，获得部分16SrDNA序列，需进一步克拢图2-2基因组DNA电泳检测Fig.2-2GelelectrophoresisofgenomicDNA2000bp1000bpM12345DEEHL2000bp1000bp图2-316SrDNA序列PCR扩增产物凝胶电泳M：DL2000Marker；1：成熟期发病叶片；2：成熟期发病枝条；3：落叶前发病叶片；4：落叶后发病枝条；5：健康植株（阴性对照）；Fig.2-3GelelectrophoresisofPCRamplificationproductsof16SrDNAM:DL2000marker;1:Theresultsshowedthattherewerethreetypesofdiseasedleavesinmaturestage;2:diseasedbranchesatmaturestage;3:diseasedleavesbeforedefoliation;4:diseasedbranchesafterdefoliation;5:healthyplants(negativecontrol);
，A260/A280在1.7-2.2，可以进行巢式PCR检测。这表明所提取基因组DNA的质量可以满足PCR要求。2.2.2.216SrDNA巢式PCR检测将所提取DNA浓度统一稀释到100μg/mL作为模板，利用特异性引物R16mF2/R16mR1进行第一轮PCR扩增，以第一轮产物稀释20倍后作为巢式PCR扩增的模板，用R16F2n/R16R2进行巢式PCR，通过1%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物特异性，得到约1.2kb的扩增片段，与预期片段大小相符（图2-3）。而阴性对照未扩增出特异性片段。所得PCR产物送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，获得部分16SrDNA序列，需进一步克拢图2-2基因组DNA电泳检测Fig.2-2GelelectrophoresisofgenomicDNA2000bp1000bpM12345DEEHL2000bp1000bp图2-316SrDNA序列PCR扩增产物凝胶电泳M：DL2000Marker；1：成熟期发病叶片；2：成熟期发病枝条；3：落叶前发病叶片；4：落叶后发病枝条；5：健康植株（阴性对照）；Fig.2-3GelelectrophoresisofPCRamplificationproductsof16SrDNAM:DL2000marker;1:Theresultsshowedthattherewerethreetypesofdiseasedleavesinmaturestage;2:diseasedbranchesatmaturestage;3:diseasedleavesbeforedefoliation;4:diseasedbranchesafterdefoliation;5:healthyplants(negativecontrol);
【参考文献】：
期刊论文
[1]枣疯病发生规律及防治措施[J]. 朱自平,王殿宏,曹立娜. 现代农村科技. 2020(08)
[2]枣区枣疯病发生情况调查及防治建议[J]. 王巧玲. 河南林业科技. 2019(03)
[3]植物疫苗鄂鲁冷特对番茄青枯病的田间防治效果[J]. 郑雪芳,刘波,朱育菁,林抗美,葛慈斌,陈德局. 植物保护学报. 2018(05)
[4]浅谈泡桐丛枝病的发生和防治技术[J]. 胡慧,蔡战伟. 花卉. 2018(18)
[5]施药治疗板栗黄化皱缩病效果调查[J]. 李志朋. 中国植保导刊. 2018(01)
[6]枣疯病研究进展[J]. 郭建民,杨俊强,薛新平,马光跃,申仲妹. 山西农业科学. 2017(08)
[7]寡核苷酸管芯片技术检测和鉴别我国不同组植原体[J]. 王圣洁,林彩丽,严东辉,于少帅,李永,汪来发,朴春根,郭民伟,淮稳霞,田国忠. 林业科学研究. 2017(01)
[8]四环素与阿维菌素复配防治柳树植原体病害初探[J]. 李岩峰,邹大军. 林业科技通讯. 2015(07)
[9]枣疯植原体rp基因和secY基因序列分析[J]. 张磊,韩翔,隋丹丹,吴景龙,吴云锋,韩崇选. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(07)
[10]枣疯病植原体越冬后向枣树不同类型新生组织转移特性研究[J]. 石小玉,郝少东,王合,陶万强,杨宝东,张志勇,薛正,孙淑玲,王进忠. 北京农学院学报. 2014(03)
硕士论文
[1]几种植原体病害病原分子鉴定与枣疯植原体imp基因克隆[D]. 董雅容.北京农学院 2018
[2]南京构树黄化卷叶病植原体的研究及其它几种植原体的检测[D]. 梅丛进.南京农业大学 2016
[3]四种观赏植物植原体病害的分子检测与鉴定[D]. 高颖.山东农业大学 2014
[4]丛枝病植原体在泡桐体内分布特点和周年变化规律的研究[D]. 介大委.河南农业大学 2009
[5]泡桐丛枝病植原体延伸因子tuf基因分析及其他寄主植物的检测[D]. 王洁.山东农业大学 2008
[6]重阳木丛枝病植原体的分子鉴定及与其它几种植原体的相关性研究[D]. 赖帆.中国林业科学研究院 2007
[7]组培条件下枣疯病治疗康复药剂筛选研究[D]. 杜强.河北农业大学 2006
[8]我国几种木本植物植原体的分子检测与鉴定[D]. 李永.中国林业科学研究院 2004
本文编号：3277748
【文章来源】：河北科技师范学院河北省
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
“板栗小叶病”各时期症状A发病植株B健康植株Fig.2-1Symptomsof"Smallleafofchestnut"AisthediseasedplantandBisthehealthyplant成熟期A1A2B1B2
将所提取DNA浓度统一稀释到100μg/mL作为模板，利用特异性引物R16mF2/R16mR1进行第一轮PCR扩增，以第一轮产物稀释20倍后作为巢式PCR扩增的模板，用R16F2n/R16R2进行巢式PCR，通过1%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物特异性，得到约1.2kb的扩增片段，与预期片段大小相符（图2-3）。而阴性对照未扩增出特异性片段。所得PCR产物送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，获得部分16SrDNA序列，需进一步克拢图2-2基因组DNA电泳检测Fig.2-2GelelectrophoresisofgenomicDNA2000bp1000bpM12345DEEHL2000bp1000bp图2-316SrDNA序列PCR扩增产物凝胶电泳M：DL2000Marker；1：成熟期发病叶片；2：成熟期发病枝条；3：落叶前发病叶片；4：落叶后发病枝条；5：健康植株（阴性对照）；Fig.2-3GelelectrophoresisofPCRamplificationproductsof16SrDNAM:DL2000marker;1:Theresultsshowedthattherewerethreetypesofdiseasedleavesinmaturestage;2:diseasedbranchesatmaturestage;3:diseasedleavesbeforedefoliation;4:diseasedbranchesafterdefoliation;5:healthyplants(negativecontrol);
，A260/A280在1.7-2.2，可以进行巢式PCR检测。这表明所提取基因组DNA的质量可以满足PCR要求。2.2.2.216SrDNA巢式PCR检测将所提取DNA浓度统一稀释到100μg/mL作为模板，利用特异性引物R16mF2/R16mR1进行第一轮PCR扩增，以第一轮产物稀释20倍后作为巢式PCR扩增的模板，用R16F2n/R16R2进行巢式PCR，通过1%琼脂糖凝胶电泳检测其扩增产物特异性，得到约1.2kb的扩增片段，与预期片段大小相符（图2-3）。而阴性对照未扩增出特异性片段。所得PCR产物送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，获得部分16SrDNA序列，需进一步克拢图2-2基因组DNA电泳检测Fig.2-2GelelectrophoresisofgenomicDNA2000bp1000bpM12345DEEHL2000bp1000bp图2-316SrDNA序列PCR扩增产物凝胶电泳M：DL2000Marker；1：成熟期发病叶片；2：成熟期发病枝条；3：落叶前发病叶片；4：落叶后发病枝条；5：健康植株（阴性对照）；Fig.2-3GelelectrophoresisofPCRamplificationproductsof16SrDNAM:DL2000marker;1:Theresultsshowedthattherewerethreetypesofdiseasedleavesinmaturestage;2:diseasedbranchesatmaturestage;3:diseasedleavesbeforedefoliation;4:diseasedbranchesafterdefoliation;5:healthyplants(negativecontrol);
【参考文献】：
期刊论文
[1]枣疯病发生规律及防治措施[J]. 朱自平,王殿宏,曹立娜. 现代农村科技. 2020(08)
[2]枣区枣疯病发生情况调查及防治建议[J]. 王巧玲. 河南林业科技. 2019(03)
[3]植物疫苗鄂鲁冷特对番茄青枯病的田间防治效果[J]. 郑雪芳,刘波,朱育菁,林抗美,葛慈斌,陈德局. 植物保护学报. 2018(05)
[4]浅谈泡桐丛枝病的发生和防治技术[J]. 胡慧,蔡战伟. 花卉. 2018(18)
[5]施药治疗板栗黄化皱缩病效果调查[J]. 李志朋. 中国植保导刊. 2018(01)
[6]枣疯病研究进展[J]. 郭建民,杨俊强,薛新平,马光跃,申仲妹. 山西农业科学. 2017(08)
[7]寡核苷酸管芯片技术检测和鉴别我国不同组植原体[J]. 王圣洁,林彩丽,严东辉,于少帅,李永,汪来发,朴春根,郭民伟,淮稳霞,田国忠. 林业科学研究. 2017(01)
[8]四环素与阿维菌素复配防治柳树植原体病害初探[J]. 李岩峰,邹大军. 林业科技通讯. 2015(07)
[9]枣疯植原体rp基因和secY基因序列分析[J]. 张磊,韩翔,隋丹丹,吴景龙,吴云锋,韩崇选. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(07)
[10]枣疯病植原体越冬后向枣树不同类型新生组织转移特性研究[J]. 石小玉,郝少东,王合,陶万强,杨宝东,张志勇,薛正,孙淑玲,王进忠. 北京农学院学报. 2014(03)
硕士论文
[1]几种植原体病害病原分子鉴定与枣疯植原体imp基因克隆[D]. 董雅容.北京农学院 2018
[2]南京构树黄化卷叶病植原体的研究及其它几种植原体的检测[D]. 梅丛进.南京农业大学 2016
[3]四种观赏植物植原体病害的分子检测与鉴定[D]. 高颖.山东农业大学 2014
[4]丛枝病植原体在泡桐体内分布特点和周年变化规律的研究[D]. 介大委.河南农业大学 2009
[5]泡桐丛枝病植原体延伸因子tuf基因分析及其他寄主植物的检测[D]. 王洁.山东农业大学 2008
[6]重阳木丛枝病植原体的分子鉴定及与其它几种植原体的相关性研究[D]. 赖帆.中国林业科学研究院 2007
[7]组培条件下枣疯病治疗康复药剂筛选研究[D]. 杜强.河北农业大学 2006
[8]我国几种木本植物植原体的分子检测与鉴定[D]. 李永.中国林业科学研究院 2004
本文编号：3277748
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