柞蚕类serpin-1基因的鉴定与功能分析
发布时间：2021-07-20 13:18
柞蚕（Antheraea pernyi）最早在中国山东地区发现并开始养殖驯化,是我国重要的一类野生绢丝昆虫。丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin）在昆虫的先天免疫中通过与丝氨酸蛋白酶相互制约达到一定的动态平衡,从而调节生物体内很多的生命活动,在昆虫的先天免疫中发挥重要的作用。本文主要研究serpin-1like基因的表达模式和在柞蚕先天免疫中的功能,研究结果如下:本研究利用PCR技术成功克隆并获得一个读码框为837 bp的serpin-1like基因,其含有一个保守的serpin结构域,进化树分析显示其与印度柞蚕亲缘关系最近,同源性高达为82.1%。通过构建原核表达载体pET-28a-Ap-serpin-1like,并经不同浓度IPTG诱导成功获得了重组pET-28a-Ap-serpin-1like蛋白。大量诱导后使用蛋白纯化柱对重组蛋白进行纯化,得到浓度和纯度都非常高的pET-28a-Ap-serpin-1like蛋白,蛋白浓度约为0.5mg/ml。以获得的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,通过实验室常规取血方法取血得到Ap-serpin-1like抗体并检测效价约为1:128000。利用...
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
柞蚕脂肪体总RNA分析
图 4-2 柞蚕 Ap-serpin-1like 蛋白的进化树分析Fig. 4-2 Phylogenetic analysis based on the Ap-serpin-1like amino acid sequences from various species.用于构建进化树的 Ap-serpin-1like 蛋白的物种为：蓓带夜蛾(Mamestra configurata) 甘蓝夜蛾(Mamestrabrassicae) 天蚕蛾(Lonomia obliqua) 柑橘凤蝶(Papilio xuthus) 棉铃虫(Helicoverpa armigera) 金凤蝶(Papiliomachaon) 大红斑蝶(Danaus plexippus) 小菜蛾(Plutella xylostella) 红带袖蝶(Heliconius melpomene) 艺神袖蝶(Heliconius erato) 二化螟(Chilo suppressalis) 冬尺蠖蛾(Operophtera brumata) 脐橙螟(Amyelois transitella)印度柞蚕(Antheraea mylitta) 家蚕(Bombyx mori) 野桑蚕(Bombyx mandarina) 烟草天蛾(Manduca sexta) 亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis) 玉带凤蝶(Papilio polytes) 云杉蚜虫(Choristoneura fumiferana)表 4-1 柞蚕 serpin-1like 同源性分析Table. 4-1 Homology matrix of Antheraea pernyi serpin-1like1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121 100%2 82.1% 100%3 57.4% 58.0% 100%4 62.3% 64.1% 60.2% 100%5 56.3% 58.0% 91.3% 62.0% 100%6 53.7% 51.0% 63.7% 58.1% 67.3% 100%7 48.0% 44.8% 54.1% 58.1% 57.1% 56.0% 100%8 51.1% 50.7% 58.2% 57.3% 60.7% 61.6% 54.7% 100%
（Manduca sexta）5.甘蓝夜蛾（Mamestra brassicae）6.棉铃虫（Helicoverpa armigera）7.小菜蛾（Plutellaxylostella）8.玉米螟（Ostrinia furnacalis）9.野桑蚕（Bombyx mandarina）10.云杉蚜虫（Choristoneura fumiferana）11.黑脉金斑蝶（Danaus plexippus）12.脐橙螟（Amyelois transitella）4.2.2 Ap-serpin-1like 蛋白的信号肽分析 由于用 SignalP 网络在线的方法对信号肽的预测十分准确，本实验也采取此方法对 Ap-serpin-1like 的信号肽进行预测，该软件利用隐马尔可夫模型(HMM)和神经网络法(NN)两种方法预测分析。结果显示 Ap-serpin-1like 第 1 至 18 氨基酸残基为信号肽，如图 4-3 所示：
【参考文献】：
期刊论文
[1]ApNPV诱导柞蚕脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达及表达载体构建[J]. 方素云,韩焱,李文利. 蚕业科学. 2014(04)
[2]柞蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI基因克隆及表达特征分析[J]. 王磊,邱建烽,钱岑,朱保建,刘朝良. 应用昆虫学报. 2014(04)
[3]白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达[J]. 程金芝,孙宇,陈璐,刘鉴,吴家红. 中国人兽共患病学报. 2014(05)
[4]野桑蚕serpin2基因的克隆及转录表达分析[J]. 盛东峰,张永亮,赵锦慧,胡春红. 华中师范大学学报(自然科学版). 2013(04)
[5]Maspin与p53在宫颈鳞癌中的表达及相关性分析[J]. 方世兰,严倩,张永欣,陈明霞. 中国妇产科临床杂志. 2009(05)
[6]家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6的克隆、序列分析和组织表达[J]. 刘衬丽,王东,李兵,管京敏,俞燕芳,査宏贤,许雅香,沈卫德. 昆虫学报. 2009(01)
[7]柞蚕功能基因研究进展[J]. 刘彦群,姜德富. 蚕业科学. 2008(03)
[8]丝氨酸蛋白酶抑制剂和血管内皮生长因子基因在口腔鳞癌中的表达[J]. 张雷,唐曕贵,仝向娟. 中华口腔医学杂志. 2004(05)
[9]丝氨酸蛋白酶SNC19及其抑制因子在胃癌中的表达[J]. 曾蕾,曹江,张行. 中华消化杂志. 2004(07)
[10]丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究及应用[J]. 张梅,朱柞铭. 生物化学与生物物理进展. 1996(03)
博士论文
[1]家蚕Serpin家族蛋白酶抑制剂的结构与功能研究[D]. 刘骋.南京农业大学 2014
[2]家蚕先天免疫的模式识别、信号传导和抗微生物肽基因表达调控机制研究[D]. 许平震.西南大学 2010
硕士论文
[1]微生物诱导柞蚕血淋巴溶菌酶基因表达及分析[D]. 宋佳.沈阳农业大学 2013
[2]柞蚕模式识别受体βGRP、immulectins基因的克隆及表达分析[D]. 李凤娟.大连理工大学 2012
[3]柞蚕免疫相关因子Apdorsal的克隆、鉴定及表达分析[D]. 刘媛.大连理工大学 2011
本文编号：3292897
【文章来源】：安徽农业大学安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
柞蚕脂肪体总RNA分析
图 4-2 柞蚕 Ap-serpin-1like 蛋白的进化树分析Fig. 4-2 Phylogenetic analysis based on the Ap-serpin-1like amino acid sequences from various species.用于构建进化树的 Ap-serpin-1like 蛋白的物种为：蓓带夜蛾(Mamestra configurata) 甘蓝夜蛾(Mamestrabrassicae) 天蚕蛾(Lonomia obliqua) 柑橘凤蝶(Papilio xuthus) 棉铃虫(Helicoverpa armigera) 金凤蝶(Papiliomachaon) 大红斑蝶(Danaus plexippus) 小菜蛾(Plutella xylostella) 红带袖蝶(Heliconius melpomene) 艺神袖蝶(Heliconius erato) 二化螟(Chilo suppressalis) 冬尺蠖蛾(Operophtera brumata) 脐橙螟(Amyelois transitella)印度柞蚕(Antheraea mylitta) 家蚕(Bombyx mori) 野桑蚕(Bombyx mandarina) 烟草天蛾(Manduca sexta) 亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis) 玉带凤蝶(Papilio polytes) 云杉蚜虫(Choristoneura fumiferana)表 4-1 柞蚕 serpin-1like 同源性分析Table. 4-1 Homology matrix of Antheraea pernyi serpin-1like1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121 100%2 82.1% 100%3 57.4% 58.0% 100%4 62.3% 64.1% 60.2% 100%5 56.3% 58.0% 91.3% 62.0% 100%6 53.7% 51.0% 63.7% 58.1% 67.3% 100%7 48.0% 44.8% 54.1% 58.1% 57.1% 56.0% 100%8 51.1% 50.7% 58.2% 57.3% 60.7% 61.6% 54.7% 100%
（Manduca sexta）5.甘蓝夜蛾（Mamestra brassicae）6.棉铃虫（Helicoverpa armigera）7.小菜蛾（Plutellaxylostella）8.玉米螟（Ostrinia furnacalis）9.野桑蚕（Bombyx mandarina）10.云杉蚜虫（Choristoneura fumiferana）11.黑脉金斑蝶（Danaus plexippus）12.脐橙螟（Amyelois transitella）4.2.2 Ap-serpin-1like 蛋白的信号肽分析 由于用 SignalP 网络在线的方法对信号肽的预测十分准确，本实验也采取此方法对 Ap-serpin-1like 的信号肽进行预测，该软件利用隐马尔可夫模型(HMM)和神经网络法(NN)两种方法预测分析。结果显示 Ap-serpin-1like 第 1 至 18 氨基酸残基为信号肽，如图 4-3 所示：
【参考文献】：
期刊论文
[1]ApNPV诱导柞蚕脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达及表达载体构建[J]. 方素云,韩焱,李文利. 蚕业科学. 2014(04)
[2]柞蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI基因克隆及表达特征分析[J]. 王磊,邱建烽,钱岑,朱保建,刘朝良. 应用昆虫学报. 2014(04)
[3]白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达[J]. 程金芝,孙宇,陈璐,刘鉴,吴家红. 中国人兽共患病学报. 2014(05)
[4]野桑蚕serpin2基因的克隆及转录表达分析[J]. 盛东峰,张永亮,赵锦慧,胡春红. 华中师范大学学报(自然科学版). 2013(04)
[5]Maspin与p53在宫颈鳞癌中的表达及相关性分析[J]. 方世兰,严倩,张永欣,陈明霞. 中国妇产科临床杂志. 2009(05)
[6]家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6的克隆、序列分析和组织表达[J]. 刘衬丽,王东,李兵,管京敏,俞燕芳,査宏贤,许雅香,沈卫德. 昆虫学报. 2009(01)
[7]柞蚕功能基因研究进展[J]. 刘彦群,姜德富. 蚕业科学. 2008(03)
[8]丝氨酸蛋白酶抑制剂和血管内皮生长因子基因在口腔鳞癌中的表达[J]. 张雷,唐曕贵,仝向娟. 中华口腔医学杂志. 2004(05)
[9]丝氨酸蛋白酶SNC19及其抑制因子在胃癌中的表达[J]. 曾蕾,曹江,张行. 中华消化杂志. 2004(07)
[10]丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究及应用[J]. 张梅,朱柞铭. 生物化学与生物物理进展. 1996(03)
博士论文
[1]家蚕Serpin家族蛋白酶抑制剂的结构与功能研究[D]. 刘骋.南京农业大学 2014
[2]家蚕先天免疫的模式识别、信号传导和抗微生物肽基因表达调控机制研究[D]. 许平震.西南大学 2010
硕士论文
[1]微生物诱导柞蚕血淋巴溶菌酶基因表达及分析[D]. 宋佳.沈阳农业大学 2013
[2]柞蚕模式识别受体βGRP、immulectins基因的克隆及表达分析[D]. 李凤娟.大连理工大学 2012
[3]柞蚕免疫相关因子Apdorsal的克隆、鉴定及表达分析[D]. 刘媛.大连理工大学 2011
本文编号：3292897
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