粘虫生物钟基因的克
发布时间：2021-07-25 16:43
粘虫Mythimna separata（Walker）隶属鳞翅目夜蛾科,是一种典型的季节性远距离迁飞害虫,也是严重威胁我国粮食作物生产安全的重大害虫,广泛分布于亚洲和澳洲的多个国家和地区。粘虫在我国每年南北往返迁飞危害。近年来,由于农田生态系统变化,粘虫的发生危害呈现加重趋势,尤其是2012和2013年在全国范围暴发成灾,对农业生产造成了严重的影响。生物钟基因是调控生物节律的一类基因,在细胞、组织、器官和行为等各层次中起作用。而粘虫作为一种昼伏夜出性害虫,其飞行、交配、产卵等行为均发生于夜晚,具有明显的昼夜节律。但截至目前,有关其昼夜活动节律的分子调控机制尚未见报道。本研究首次对粘虫4个生物钟基因进行了克隆,在此基础上,通过实时荧光定量PCR技术分析了相应的表达模式,并就生物钟基因对粘虫活动节律的调控进行了进一步研究。取得如下主要研究结果。1.根据粘虫转录组数据库扩增获得4种粘虫生物钟基因period、timless、clock和cycle,分别命名为Msper（KY446805）、Mstim（KY446806）、Msclk（KY446807）、Mscyc（KY825136）,长度分别...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
粘虫组织总RNA琼脂糖凝胶电泳图
图 3-2 生物钟基因 PCR 结果电泳图Fig. 3-2 The PCR results of clock genes1-2: Msper，3: Mstim，4-6: Msclk，7-9: Mscyc3.2.2 氨基酸序列分析与进化树构建Msper、Mstim、Msclk、Mscyc4 个生物钟基因所编码蛋白分子量分别为 132 kDa、117kDa、69 kDa、75 kDa，理论等电点分别为 6.50、5.14、5.63、6.74。四个蛋白均无信号肽且细胞定位结果表明，主要分布于分泌通路及线粒体外的其他部位。MsPER 具有保守的 PAS 及 PAC 结构域并包含酸性氨基酸残基（Asp + Glu）140 个，碱性氨基酸残基（Arg + Lys）131 个。其蛋白质疏水性最大值为 2.389，最小值为 3.556，其中有 98 个丝氨酸（Ser），53 个苏氨酸（Thr），12 个酪氨酸（Tyr）可能被磷酸化。其预测二级结构 α-螺旋比例为 23.15%，β-折叠 2.16%，无规则卷曲 64.68%。经软件分析该蛋白质无信号肽，细胞定位结果说明该蛋白主要分布于分泌通路及线粒体外的细胞6 7 89
3.3 粘虫雌蛾生物钟基因的表达模式分析3.3.1 定量片段的确认以粘虫头部 cDNA 为模板，使用已合成的定量引物扩增粘虫生物钟基因 Msper、Mstim、Msclk、Mscyc 及 β-Actin 定量片段。结果显示，扩增得到的 5 个片段长度分别为139 bp、139 bp、106 bp、168 bp、141 bp。片段序列测序结果表明，这 5 个片段序列与其对应的 5 个粘虫基因的 cDNA 序列一致性为 100%。3.3.2 定量引物特异性检测采用实时荧光定量 PCR 体系，利用定量引物分别对粘虫生物钟基因 Msper、Mstim、Msclk、Mscyc 及内参基因 β-Actin 进行扩增。结果显示，扩增产物的熔解曲线均为单峰（图 3-5），表明这几对定量引物的特异性较好，可进一步用于基因定量试验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕昼夜节律生物钟基因的生物信息学分析[J]. 王文栋,束梅影,张达艳,徐世清. 四川动物. 2016(02)
[2]时间毒理学研究进展[J]. 秦粉菊,陈丽莉,童建. 生命科学. 2015(11)
[3]我国粘虫发生危害新特点及趋势分析[J]. 江幸福,张蕾,程云霞,罗礼智. 应用昆虫学报. 2014(06)
[4]哺乳动物生物钟与能量代谢的相关研究进展[J]. 王楠,袁拿特,富浩轩,朱雅丽,吴涛. 生命科学. 2014(09)
[5]动物隐花色素研究进展[J]. 吕垣澄,吴晓晖. 遗传. 2014(09)
[6]生物节律基因Timeless的生物学功能研究进展[J]. 宋何煜,张耀,江红. 生物技术通讯. 2014(03)
[7]昆虫的变态发育研究[J]. 曾保娟,冯启理. 应用昆虫学报. 2014(02)
[8]兴义维蚋中枢神经系统的组织学观察[J]. 寻慧,丁凯泽,杨明,陈汉彬. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(06)
[9]蓝藻生物节律性分子调控机制的研究进展[J]. 李青雁,庞羽彤,李小龙,周飞飞,张芳,霍宇鹏,赵宇玮. 基因组学与应用生物学. 2013(05)
[10]2012年黏虫暴发特点分析与监测预警建议[J]. 曾娟,姜玉英,刘杰. 植物保护. 2013(02)
博士论文
[1]草地螟对温湿度变异的适应与反应[D]. 唐继洪.中国农业科学院 2016
[2]近日节律基因per1和per2的非生物钟效应的功能研究[D]. 王跃锜.四川大学 2005
硕士论文
[1]夜蛾科6种害虫触角微观结构比较分析[D]. 魏延弟.吉林农业大学 2015
[2]稻纵卷叶螟飞行行为及与生殖的互作关系[D]. 潘攀.中国农业科学院 2013
[3]家蚕生物钟基因Cry的克隆和功能鉴定[D]. 梁辉.苏州大学 2011
[4]家蚕滞育诱导过程中近日节律基因period和timless的表达研究[D]. 宋艳.苏州大学 2009
本文编号：3302395
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
粘虫组织总RNA琼脂糖凝胶电泳图
图 3-2 生物钟基因 PCR 结果电泳图Fig. 3-2 The PCR results of clock genes1-2: Msper，3: Mstim，4-6: Msclk，7-9: Mscyc3.2.2 氨基酸序列分析与进化树构建Msper、Mstim、Msclk、Mscyc4 个生物钟基因所编码蛋白分子量分别为 132 kDa、117kDa、69 kDa、75 kDa，理论等电点分别为 6.50、5.14、5.63、6.74。四个蛋白均无信号肽且细胞定位结果表明，主要分布于分泌通路及线粒体外的其他部位。MsPER 具有保守的 PAS 及 PAC 结构域并包含酸性氨基酸残基（Asp + Glu）140 个，碱性氨基酸残基（Arg + Lys）131 个。其蛋白质疏水性最大值为 2.389，最小值为 3.556，其中有 98 个丝氨酸（Ser），53 个苏氨酸（Thr），12 个酪氨酸（Tyr）可能被磷酸化。其预测二级结构 α-螺旋比例为 23.15%，β-折叠 2.16%，无规则卷曲 64.68%。经软件分析该蛋白质无信号肽，细胞定位结果说明该蛋白主要分布于分泌通路及线粒体外的细胞6 7 89
3.3 粘虫雌蛾生物钟基因的表达模式分析3.3.1 定量片段的确认以粘虫头部 cDNA 为模板，使用已合成的定量引物扩增粘虫生物钟基因 Msper、Mstim、Msclk、Mscyc 及 β-Actin 定量片段。结果显示，扩增得到的 5 个片段长度分别为139 bp、139 bp、106 bp、168 bp、141 bp。片段序列测序结果表明，这 5 个片段序列与其对应的 5 个粘虫基因的 cDNA 序列一致性为 100%。3.3.2 定量引物特异性检测采用实时荧光定量 PCR 体系，利用定量引物分别对粘虫生物钟基因 Msper、Mstim、Msclk、Mscyc 及内参基因 β-Actin 进行扩增。结果显示，扩增产物的熔解曲线均为单峰（图 3-5），表明这几对定量引物的特异性较好，可进一步用于基因定量试验。
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕昼夜节律生物钟基因的生物信息学分析[J]. 王文栋,束梅影,张达艳,徐世清. 四川动物. 2016(02)
[2]时间毒理学研究进展[J]. 秦粉菊,陈丽莉,童建. 生命科学. 2015(11)
[3]我国粘虫发生危害新特点及趋势分析[J]. 江幸福,张蕾,程云霞,罗礼智. 应用昆虫学报. 2014(06)
[4]哺乳动物生物钟与能量代谢的相关研究进展[J]. 王楠,袁拿特,富浩轩,朱雅丽,吴涛. 生命科学. 2014(09)
[5]动物隐花色素研究进展[J]. 吕垣澄,吴晓晖. 遗传. 2014(09)
[6]生物节律基因Timeless的生物学功能研究进展[J]. 宋何煜,张耀,江红. 生物技术通讯. 2014(03)
[7]昆虫的变态发育研究[J]. 曾保娟,冯启理. 应用昆虫学报. 2014(02)
[8]兴义维蚋中枢神经系统的组织学观察[J]. 寻慧,丁凯泽,杨明,陈汉彬. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2013(06)
[9]蓝藻生物节律性分子调控机制的研究进展[J]. 李青雁,庞羽彤,李小龙,周飞飞,张芳,霍宇鹏,赵宇玮. 基因组学与应用生物学. 2013(05)
[10]2012年黏虫暴发特点分析与监测预警建议[J]. 曾娟,姜玉英,刘杰. 植物保护. 2013(02)
博士论文
[1]草地螟对温湿度变异的适应与反应[D]. 唐继洪.中国农业科学院 2016
[2]近日节律基因per1和per2的非生物钟效应的功能研究[D]. 王跃锜.四川大学 2005
硕士论文
[1]夜蛾科6种害虫触角微观结构比较分析[D]. 魏延弟.吉林农业大学 2015
[2]稻纵卷叶螟飞行行为及与生殖的互作关系[D]. 潘攀.中国农业科学院 2013
[3]家蚕生物钟基因Cry的克隆和功能鉴定[D]. 梁辉.苏州大学 2011
[4]家蚕滞育诱导过程中近日节律基因period和timless的表达研究[D]. 宋艳.苏州大学 2009
本文编号：3302395
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3302395.html
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