瓜类蚜传黄化病毒的检测和侵染性克隆构建
发布时间：2021-08-15 11:27
瓜类蚜传黄化病毒（Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV）属于黄症病毒科（Luteoviridae）,马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus）。该病毒在欧洲和亚洲的主要瓜类种植区均有报道发生,流行范围广,大面积发生时造成严重的减产。目前CABYV已在我国多个省市发生,对西甜瓜等重要经济作物的安全生产造成极大的威胁。为了了解该病毒在我国的发生情况,我们对新疆鄯善、甘肃瓜洲和河南通许地区的瓜类作物进行了取样调查。采用双抗体夹心酶联免疫吸附（DAS-ELISA）法对常见的病毒进行病毒检测,以期了解这三个地区的西瓜甜瓜病毒种类及分布,为当地西瓜和甜瓜病毒病的防控提供参考。结果表明:小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV）的检出率最高,为31.3%,其次为瓜类蚜传黄化病毒（Cucurbit aphid-borne yellows virus,CABYV）和西瓜花叶病毒（Watermelon mosaic virus,WMV）,检出率分别为26.9%、26.1%,黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CABYV基因组结构
图 1.2 CABYV 分布情况Figure 1.2 Distribution of CABYV寄主范围、传播介体及传播方式类蚜传黄化病毒首次发现时的寄主为甜瓜、黄瓜、小西葫芦。随后的鉴别寄主试验 还能侵染藜科的甜菜（Beta vulgaris L.）、菊科的莴苣（Lactuca sativa L.）和欧洲千 vulgaris L.)、十字花科的荠菜（Capsella bursa-pastoris L.）和海甘蓝（Crambe abyss）、罂粟科的虞美人（Papaver rhoeas L.）及马齿苋科的冬季马齿苋（Montia perfoliata .）（Lecoq，1992）。向海英等（2008）在 9 种葫芦科作物上发现 CABYV 的侵染，omordica charantia L.),、瓠瓜(Lagenaria siceraria (Molina) Standl.)、黄瓜(Cucumis sa瓜(Cucumis melo L.)、南瓜(Cucurbita moschata Duchesne)、西葫芦(Cucurbita pepo L.) aegyptiaca P. Mill.)、西瓜 (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai)和冬瓜(Beni(Thunb.) Cogn.)。从种植过小西葫芦的地里采集的杂草，包括欧洲千里光（Senecio vul菜（Capsella bursa-pastoris (Linn.) Medic.）及宝盖草（Lamium amplexicaule L.）也BYV 的存在，这些杂草可能作为 CABYV 越冬的场所（Lecoq et al.，1992）。BYV 不能通过机械接种传播，但能通过桃蚜（Myzus persicae）和棉蚜（Aphis gossy
图 3.1 瓜类蚜传黄化病毒（CABYV）典型症状及田间发生情况（甘肃省瓜州县，2016.7）Figure 3.1 Typical symptom and occurrence of CABYV in the field of Guazhou, Gansu province，2016.7.3 试验方法总 RNA 提取按照试剂盒的说明书进行，RT-PCR 按照反转录试剂盒说明书，PCR 产物的按照胶回收试剂盒说明书进行，胶回收片段与载体连接按照载体说明书进行。质粒提取、感细胞制备、大肠杆菌转化及菌液 PCR 等分子生物学技术参照分子克隆实验指南(第 3 版)。.3.1 总 RNA 提取按照 RNA 提取试剂盒的说明书进行总 RNA 提取，将 RNA 于-80℃保存。.3.2 RT-PCR 扩增反转录以提取的总 RNA 为模板，按照说明书进行。A. 在 PCR 管中配制 RNA/引物混合液模板 RNA 4 μLRandom Primers（25μM） 1 μL
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆哈密瓜病毒的DAS-ELISA检测和分子鉴定[J]. 潘亚南,韩剑,吴海波,吉艳玲,王纯利,刘芳,罗明,张祥林. 园艺学报. 2016(06)
[2]甘肃省河西地区瓜类作物病毒病的病原鉴定[J]. 文朝慧,南志标. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(12)
[3]南瓜蚜传黄化病毒P0蛋白基因ihpRNA载体构建及烟草转化[J]. 齐洪华,李捷,马萱,徐践. 北京农学院学报. 2012(03)
[4]葫芦科作物种传病毒及其检疫重要性[J]. 林石明,廖富荣,陈青,陈红运. 植物检疫. 2012(01)
[5]农杆菌介导的CMV侵染性克隆及2b缺失突变体构建[J]. 姚敏,张天奇,田志超,王源超,陶小荣. 中国农业科学. 2011(14)
[6]马铃薯卷叶病毒CP基因的突变及其原核表达[J]. 张建建,隋炯明,盖树鹏,宋希云,郭宝太. 东北农业大学学报. 2010(08)
[7]用酵母双杂交筛选与南瓜蚜传黄化病毒MP互作的寄主因子[J]. 陈小慧,费菲,向海英,韩成贵,程玉琴. 植物保护学报. 2010(04)
[8]葫芦科作物3种主要病毒的多重RT-PCR方法的建立[J]. 赵丽,古勤生,陈红运,史团省,田延平,胡京昂. 果树学报. 2008(05)
[9]单克隆抗体在植物病毒学中的应用[J]. 韩英,任艳玲,廖咏梅. 广西农业生物科学. 2007(S1)
[10]马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用[J]. 吴建祥,周雪平. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2005(05)
博士论文
[1]柑橘碎叶病毒侵染性克隆构建及其诱导的基因沉默（VIGS）体系建立[D]. 宋震.西南大学 2013
[2]烟草脉带花叶病毒侵染性克隆的构建及其在交叉保护、外源蛋白表达及VIGS中的应用[D]. 高瑞.山东农业大学 2012
[3]小麦黄花叶病毒侵染性cDNA克隆及细胞侵染体系的建立[D]. 董家红.中国农业大学 2004
硕士论文
[1]大麦黄矮病毒GAV株系和小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 李娜.浙江大学 2015
[2]PVS和PLRV ELISA检测试剂盒的研制与应用[D]. 李婷婷.云南大学 2014
[3]番茄黄化曲叶病毒和黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的制备及其检测应用[D]. 尚海丽.浙江大学 2011
[4]葫芦科植物病毒研究[D]. 陈洁云.浙江大学 2003
本文编号：3344462
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
CABYV基因组结构
图 1.2 CABYV 分布情况Figure 1.2 Distribution of CABYV寄主范围、传播介体及传播方式类蚜传黄化病毒首次发现时的寄主为甜瓜、黄瓜、小西葫芦。随后的鉴别寄主试验 还能侵染藜科的甜菜（Beta vulgaris L.）、菊科的莴苣（Lactuca sativa L.）和欧洲千 vulgaris L.)、十字花科的荠菜（Capsella bursa-pastoris L.）和海甘蓝（Crambe abyss）、罂粟科的虞美人（Papaver rhoeas L.）及马齿苋科的冬季马齿苋（Montia perfoliata .）（Lecoq，1992）。向海英等（2008）在 9 种葫芦科作物上发现 CABYV 的侵染，omordica charantia L.),、瓠瓜(Lagenaria siceraria (Molina) Standl.)、黄瓜(Cucumis sa瓜(Cucumis melo L.)、南瓜(Cucurbita moschata Duchesne)、西葫芦(Cucurbita pepo L.) aegyptiaca P. Mill.)、西瓜 (Citrullus lanatus (Thunb.) Matsum. & Nakai)和冬瓜(Beni(Thunb.) Cogn.)。从种植过小西葫芦的地里采集的杂草，包括欧洲千里光（Senecio vul菜（Capsella bursa-pastoris (Linn.) Medic.）及宝盖草（Lamium amplexicaule L.）也BYV 的存在，这些杂草可能作为 CABYV 越冬的场所（Lecoq et al.，1992）。BYV 不能通过机械接种传播，但能通过桃蚜（Myzus persicae）和棉蚜（Aphis gossy
图 3.1 瓜类蚜传黄化病毒（CABYV）典型症状及田间发生情况（甘肃省瓜州县，2016.7）Figure 3.1 Typical symptom and occurrence of CABYV in the field of Guazhou, Gansu province，2016.7.3 试验方法总 RNA 提取按照试剂盒的说明书进行，RT-PCR 按照反转录试剂盒说明书，PCR 产物的按照胶回收试剂盒说明书进行，胶回收片段与载体连接按照载体说明书进行。质粒提取、感细胞制备、大肠杆菌转化及菌液 PCR 等分子生物学技术参照分子克隆实验指南(第 3 版)。.3.1 总 RNA 提取按照 RNA 提取试剂盒的说明书进行总 RNA 提取，将 RNA 于-80℃保存。.3.2 RT-PCR 扩增反转录以提取的总 RNA 为模板，按照说明书进行。A. 在 PCR 管中配制 RNA/引物混合液模板 RNA 4 μLRandom Primers（25μM） 1 μL
【参考文献】：
期刊论文
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[7]用酵母双杂交筛选与南瓜蚜传黄化病毒MP互作的寄主因子[J]. 陈小慧,费菲,向海英,韩成贵,程玉琴. 植物保护学报. 2010(04)
[8]葫芦科作物3种主要病毒的多重RT-PCR方法的建立[J]. 赵丽,古勤生,陈红运,史团省,田延平,胡京昂. 果树学报. 2008(05)
[9]单克隆抗体在植物病毒学中的应用[J]. 韩英,任艳玲,廖咏梅. 广西农业生物科学. 2007(S1)
[10]马铃薯X病毒云南分离物单克隆抗体的制备及其检测应用[J]. 吴建祥,周雪平. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2005(05)
博士论文
[1]柑橘碎叶病毒侵染性克隆构建及其诱导的基因沉默（VIGS）体系建立[D]. 宋震.西南大学 2013
[2]烟草脉带花叶病毒侵染性克隆的构建及其在交叉保护、外源蛋白表达及VIGS中的应用[D]. 高瑞.山东农业大学 2012
[3]小麦黄花叶病毒侵染性cDNA克隆及细胞侵染体系的建立[D]. 董家红.中国农业大学 2004
硕士论文
[1]大麦黄矮病毒GAV株系和小麦黄花叶病毒单克隆抗体的制备及其应用[D]. 李娜.浙江大学 2015
[2]PVS和PLRV ELISA检测试剂盒的研制与应用[D]. 李婷婷.云南大学 2014
[3]番茄黄化曲叶病毒和黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的制备及其检测应用[D]. 尚海丽.浙江大学 2011
[4]葫芦科植物病毒研究[D]. 陈洁云.浙江大学 2003
本文编号：3344462
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